Übersicht: Mit dieser Methode werden wir eine saubere und kontaminationsfreie sporengefüllte Spritze herstellen. Die Spritze wird mit erhitztem und sterilisiertem Wasser gefüllt und abkühlen gelassen. Die Sporen werden dann mit einem gereinigten und desinfizierten Schnapsglas vom Sporenabdruck in die Spritzenlösung übertragen. Nach Abschluss dieses Tek haben Sie eine Sporenlösungsspritze erstellt, die für jede Mikroskopieanwendung geeignet ist.HINWEIS: Diese Anweisungen sind am effektivsten, wenn sie in der sterilsten verfügbaren Umgebung durchgeführt werden. Das bevorzugte Verfahren besteht darin, die folgenden Schritte auszuführen, während in einem sauberen und sterilen Handschuhfach oder vor einer Laminar-Flow-Haube gearbeitet wird. Wenn Sie keine Handschuhbox bauen möchten oder keine haben, wurden die folgenden Schritte mit Erfolg durchgeführt, indem an einer gründlich gereinigten und desinfizierten Arbeitsplatte gearbeitet wurde. Zur Reinigung und Desinfektion des Arbeitsbereichs wird die Verwendung von Sprühdesinfektionsmittel und verdünnter Bleichlösung empfohlen.
Benötigte Materialien:
Leere sterile Spritzen
Zwei Liter (oder größer) Kochtopf
Eine Flasche 91% Isopropylalkohol
Mehrere Papiertücher
Ein Feuerzeug oder eine Alkoholflamme
Ein Schnapsglas
Steriler Sporenabdruck
Verfahren Eins: Herstellung einer sterilen Spritze
1. Füllen Sie Ihren Kochtopf zur Hälfte mit Leitungswasser oder destilliertem Wasser (verwenden Sie destilliertes Wasser, wenn Ihr Leitungswasser einen höheren Gehalt an Mineralien und Chemikalien enthält).
2. Kochen Sie das Wasser in den Topf auf hoch für mindestens zehn Minuten, sollte dies ausreichend sein, zu sterilisieren und reinigt das Wasser von allen Bakterien, Viren und Schimmelpilzsporen.
3. Nehmen Sie Ihre leere Spritze und füllen Sie sie mit kochendem Wasser. Lassen Sie es für zwei Minuten mit dem heißen Wasser im Inneren sitzen. (Wenn Ihre Spritze steril verpackt war, überspringen Sie die Schritte 4 und 5).
4. Spülen Sie das heiße Wasser aus der Spritze in eine Spüle, nicht zurück in den Topf.
5. Wiederholen Sie die Schritte 3 und 4 noch zweimal. Beim zweiten Mal lassen Sie das heiße Wasser in der Spritze.
6. Legen Sie die Spritze an einen kühlen, zugfreien Ort, vorzugsweise in einen sauberen Reißverschlussbeutel
7. Lassen Sie es einige Stunden abkühlen, bevor Sie mit dem zweiten Verfahren fortfahren.
Verfahren Zwei: Übertragung der Sporen in die Spritze
1. Reinigen Sie zuerst Ihren Arbeitsbereich. Dies kann beinhalten, alle Arbeitsflächen mit einer verdünnten Bleichlösung abzuwischen und den Bereich großzügig mit einem Desinfektionsmittel wie Lysol zu besprühen.
2. Legen Sie die folgenden Materialien in Ihr Handschuhfach oder auf die gereinigte und desinfizierte Arbeitsfläche: Das Schnapsglas, Ihre gekühlten Spritzen, die Alkoholflasche, ein Papiertuch, Ihren Aufdruck (noch im Zip-Lock-Beutel) und das Feuerzeug oder die Alkoholflamme.
3. Waschen Sie die Hände mit antibakterieller Seife, bevor Sie fortfahren.
4. Falten Sie das Papiertuch in ¼ Abschnitte und tränken Sie eine Ecke davon mit dem Alkohol.
5. Wischen Sie mit dem alkoholgetränkten Handtuch das Innere des Schnapsglases ab und sterilisieren Sie im Wesentlichen die Oberfläche, die Sie beim Transfer verwenden möchten. Lassen Sie das Schnapsglas an der Luft trocknen, sollte nur ein paar Sekunden dauern.
6. Entfernen Sie den Nadelschutz von Ihrer sterilen Spritze und sterilisieren Sie die Nadel mit einer Flamme. Nehmen Sie dann Ihr alkoholgetränktes Papiertuch und wischen Sie die Nadel ab, um die Sterilisation weiter zu unterstützen. Versuchen Sie zu vermeiden, dass die Nadel eine andere Oberfläche berührt, sofern nicht anders angegeben.
7.HINWEIS: An dieser Stelle ist es wichtig, so schnell wie möglich zu arbeiten, um die Wahrscheinlichkeit zu verringern, dass Schimmelpilze und Bakterien in Ihren Arbeitsbereich gelangen und dadurch Ihre Spritze ruinieren.
8. Entfernen Sie den Druck aus dem Aufbewahrungsbeutel. Entfalten Sie es, um die Sporen freizulegen. Beginnen Sie leicht, mit der Nadel der Spritze einen Abschnitt des Abdrucks in das Schnapsglas abzukratzen. Für einen mittelgroßen Druck reicht es normalerweise aus, einen Abschnitt abzukratzen, der nicht größer als 1/5 des Gesamtdrucks ist.
9. Sie haben eine kleine auffällige Sammlung von Sporen im Schnapsglas. Löschen Sie nun nicht mehr als die Hälfte des Wassers aus der Spritze in das Schnapsglas und rühren Sie die Sporen leicht in die Lösung.
10. Saugen Sie die Sporenwasserlösung in die Spritze. Möglicherweise müssen Sie noch etwas Wasser in das Schnapsglas geben und erneut saugen, um alle Sporen in die Spritze einzufangen.
11. Sobald Sie die Sporenlösung wieder in der Spritze haben, sollten Sie feststellen, dass das Wasser im Inneren leicht getönt ist und Sie kleine Sporen in der Lösung schwimmen sehen können. Das ist gut, Sie haben den Prozess abgeschlossen.
12. Sterilisieren Sie die Nadel erneut mit dem alkoholgetränkten Papiertuch, setzen Sie den Nadelschutz wieder auf und legen Sie die Spritze wieder in Ihren sauberen Zip-Lock-Beutel.
13. Lassen Sie die Spritze für nicht weniger als 12 Stunden sitzen, bevor Sie in der Mikroskopie Anwendung oder Impfung für essbare Sorten. Je älter der verwendete Druck ist, desto „dehydrierter“ werden die Sporen. Für eine ordnungsgemäße mikroskopische Beobachtung oder Keimung müssen die Sporen rehydriert werden.