Description
Le réactif de Thermo Scientific Pierce Ellman (DTNB) réagit avec les groupes sulfhydryle pour donner un produit coloré, fournissant une méthode fiable pour mesurer les cystéines réduites et d’autres sulfhydryles libres en solution.
Le réactif d’Ellman (5,5′-dithio-bis-) est utilisé pour estimer les groupes sulfhydryle dans un échantillon en comparant à une courbe standard d’un composé contenant du sulfhydryle tel que la cystéine. Alternativement, les groupes sulfhydryle peuvent être dosés en utilisant le coefficient d’extinction du TNB (14 150 M-1 cm-1 à 412 nm). Le réactif d’Ellman a été utilisé pour d’autres applications que l’estimation des sulfhydryles, par exemple pour déterminer les alkylthiols par CLHP en utilisant une procédure de dérivatisation pré-colonne et pour étudier les thiols dans le site actif de plusieurs enzymes.
Caractéristiques du réactif d’Ellman:
• Dosage du sulfhydryle – réagit quantitativement avec des groupes sulfhydryle libres (réduits) (-SH) pour donner un produit TNB détectable
• Détection colorimétrique — le produit coloré permet une mesure spectrophotométrique dans des cuvettes ou des microplaques (λmax = 412nm; ε = 14 150 / M · cm)
• Méthode éprouvée — une chimie bien caractérisée permet de quantifier des groupes peptidiques ou protéiques sulfhydryles en utilisant le calcul du coefficient d’extinction ou par comparaison avec un étalon de cystéine
Propriétés du réactif
• Noms alternatifs: DTNB, Réactif d’Ellman
• Nom chimique: 5,5′-dithio-bis- (acide 2-nitrobenzoïque)
• Réactif vis-à—vis des groupes sulfhydryles (-SH)
• Formule chimique: C14H8N2O8S2
• Numéro CAS: 69-78-3
• Poids moléculaire: 396,35
• Forme: La poudre cristalline jaune
Le DTNB réagit avec un groupe sulfhydryle libre pour donner un disulfure mixte et de l’acide 2-nitro-5-thiobenzoïque (TNB). La cible du DTNB dans cette réaction est la base conjuguée (R-S-) d’un groupe sulfhydryle libre. La vitesse de cette réaction dépend donc de plusieurs facteurs : (1) le pH de la réaction, (2) le pKa’ du sulfhydryle et (3) les effets stériques et électrostatiques. Le TNB est l’espèce colorée produite dans cette réaction et a un coefficient d’extinction molaire élevé dans la gamme visible. Le coefficient d’extinction molaire du TNB a été initialement rapporté par Ellman (1959) à 13 600 M-1 cm-1 à 412 nm et à un pH de 8,0. Par conséquent, cette valeur a été fréquemment citée dans la littérature. Des études ultérieures ont cependant montré que le coefficient d’extinction molaire est reflété plus précisément par une valeur de 14 150 M-1 cm-1 à 412 nm. L’extinction du TNB n’est pas affectée par les changements de pH entre 7,6 et 8,6. Cependant, l’extinction du TNB est différente dans d’autres solvants.