Las células madre neuronales (NSC) dan lugar al sistema nervioso central (SNC) durante el desarrollo y contribuyen a la plasticidad celular del cerebro de los mamíferos adultos. El aislamiento y el cultivo in vitro de NSCs brinda la oportunidad única de abordar preguntas fundamentales sobre la proliferación celular, la elección del destino, la diferenciación y la maduración sináptica en condiciones definidas experimentalmente. La base teórica de la biología del NSC se basa básicamente en las tres propiedades definitorias que un único NSC debe cumplir: autorrenovación, multipotencia y clonalidad. Una herramienta popular de cultivo celular, el ensayo de neuroesferas, se ha utilizado para estudiar estas características clave de los NSC desde 1992. Ensayos similares se están utilizando ahora para otras células madre somáticas, incluidas las células madre cancerosas. Se ha logrado un progreso reciente en el campo de las células madre revisando el concepto de neuroesferas y demostrando su potencial y límites reales. Este artículo discute las consecuencias inmediatas de estos hallazgos y enfatiza la necesidad de un protocolo mejorado y comúnmente aceptado para la caracterización de los NSC in vitro.