Inoculacióneditar
Los técnicos de laboratorio inoculan la muestra en ciertas placas de agar sólido con el método de placas de rayas o en un medio de cultivo líquido, dependiendo de cuál sea el objetivo del aislamiento:
- Si se desea aislar solo un grupo particular de bacterias, como los estreptococos del Grupo A de un hisopo de garganta, se puede utilizar un medio selectivo que suprimirá el crecimiento de bacterias concomitantes que se espera en la mezcla (mediante antibióticos presentes en agar), de modo que solo se «seleccionan» los estreptococos, es decir, se destacan visiblemente. Para aislar hongos, se puede usar agar Sabouraud. Alternativamente, las condiciones letales para estreptococos y bacterias gram negativas, como las altas concentraciones de sal en el agar salino de Manitol, favorecen la supervivencia de cualquier estafilococo presente en una muestra de bacterias intestinales, y el rojo fenol en el agar actúa como un indicador de ph que muestra si las bacterias son capaces de fermentar manitol excretando ácido en el medio. En otras sustancias de agar se añaden para explotar la capacidad de un organismo de producir un pigmento visible (p. ej. medio granada para Estreptococos del Grupo B) que cambia el color de la colonia bacteriana, o para disolver el agar sanguíneo por hemólisis para que puedan detectarse más fácilmente. Algunas bacterias como las especies de Legionella requieren nutrientes particulares o unión a toxinas como en el carbón para crecer y, por lo tanto, se deben usar medios como el agar de extracto de levadura de carbón tamponado.
- Si se desea aislar tantas o todas las cepas posibles, se deben inocular diferentes medios nutritivos, así como medios enriquecidos, como el agar de sangre y el agar de chocolate, y medios de cultivo anaeróbicos como el caldo de tioglicolato. Para enumerar el crecimiento, las bacterias pueden suspenderse en agar fundido antes de que se solidifiquen, y luego verterse en placas de petri, el llamado «método de placa de vertido» que se utiliza en microbiología ambiental y en microbiología de alimentos (por ejemplo, pruebas de productos lácteos) para establecer el llamado «recuento de placas aeróbicas».
Incubacióneditar
Después de inocular la muestra en o sobre el medio de elección, se incuban en los ajustes atmosféricos adecuados, como condiciones aeróbicas, anaeróbicas o microaerófilas o con dióxido de carbono añadido (5%), a diferentes ajustes de temperatura, por ejemplo, 37 °C en una incubadora o en un refrigerador para enriquecimiento en frío, bajo la luz adecuada, por ejemplo, estrictamente sin luz envuelta en papel o en una botella oscura para micobacterias de escocromógeno, y para largos de tiempo, porque diferentes bacterias crecen a una velocidad diferente, variando de horas (Escherichia coli) a semanas (p. ej. micobacterias).
A intervalos regulares y en serie, los técnicos de laboratorio y los microbiólogos inspeccionan el medio en busca de signos de crecimiento visible y lo registran. La inspección debe realizarse de nuevo en condiciones que favorezcan la supervivencia del aislado, es decir, en una «cámara anaeróbica» para bacterias anaeróbicas, por ejemplo, y en condiciones que no amenacen a la persona que mira las placas de ser infectada por un microbio particularmente infeccioso, es decir, bajo un gabinete de seguridad biológica para Yersinia pestis (peste) o Bacillus anthracis (ántrax), por ejemplo.
Identificacióneditar
Cuando las bacterias han crecido visiblemente, a menudo siguen mezcladas. La identificación de un microbio depende del aislamiento de una colonia individual, ya que la prueba bioquímica de un microbio para determinar sus diferentes características fisiológicas depende de un culture.To hacer una subcultura, una vez más trabaja en técnica aséptica en microbiología, levantando una sola colonia de la superficie de agar con un bucle y rayando el material en los 4 cuadrantes de una placa de agar o por todas partes si la colonia era singular y no parecía mezclada.
La tinción de gramo de la muestra cruda antes de la incubación o la tinción de material de colonia recién crecido ayuda a determinar si una colonia consiste en bacterias de apariencia uniforme o está mezclada, y el color y la forma de las bacterias permiten una primera clasificación basada en la morfología. En microbiología clínica se utilizan muchas otras técnicas de tinción para organismos particulares (tinción bacteriana rápida ácida para micobacterias). Las técnicas de tinción inmunológica, como la inmunofluorescencia directa, se han desarrollado para patógenos médicamente importantes que son de crecimiento lento (tinción de auramina y rodamina para micobacterias) o difíciles de cultivar (como las especies de Legionella pneumophila) y donde el resultado de la prueba alteraría el manejo estándar y la terapia empírica.
Las pruebas bioquímicas de bacterias implican un conjunto de agares en viales para separar los móviles de los no móviles bacteria.In 1970 se desarrolló una versión miniaturizada, llamada índice de perfil analítico.
Identificación exitosa a través de p.ej. la secuenciación del genoma y la genómica dependen de cultivos puros.