Descripción general: Con este método vamos a crear una jeringa llena de esporas limpia y libre de contaminantes. La jeringa se llenará con agua caliente y esterilizada y se dejará enfriar. A continuación, las esporas se transferirán de la impresión de esporas a la solución de la jeringa utilizando un vaso de chupito limpio y desinfectado. Al finalizar este Tek, habrá creado una jeringa de solución de esporas lista para usar en cualquier aplicación de microscopía.NOTA: Estas instrucciones son más eficaces cuando se realizan en el entorno más estéril disponible. El método preferido consiste en seguir los pasos a continuación mientras se trabaja en una guantera limpia y estéril o frente a una campana de flujo laminar. Si no desea construir una guantera, o no tiene una, los siguientes pasos se han realizado con éxito trabajando en una encimera completamente limpia y desinfectada. Se recomienda el uso abundante de desinfectante en aerosol y solución de lejía diluida para limpiar y desinfectar el área de trabajo.
Materiales necesarios: Jeringas estériles vacías Dos cuartos de galón (o más grandes) Una botella de alcohol isopropílico al 91% Varias toallas de papel Una llama más ligera o alcohólica Un vaso de chupito Impresión de esporas estériles Procedimiento Uno: Fabricación de una jeringa estéril 1. Llene la olla hasta la mitad con agua del grifo o destilada (use agua destilada si el agua del grifo contiene niveles más altos de minerales y productos químicos).
2. Hierva el agua en la olla a fuego alto durante un mínimo de diez minutos, esto debe ser adecuado para esterilizar y limpiar el agua de todas las bacterias, virus y esporas de moho.
3. Tome la jeringa vacía y llénela con el agua hirviendo. Déjelo reposar durante dos minutos con el agua caliente dentro. (Si su jeringa estaba empaquetada para esterilidad, omita los pasos 4 y 5).
4. Purgue el agua caliente de la jeringa en un fregadero, no de nuevo en la cacerola.
5. Repita los pasos 3 y 4 dos veces más. La segunda vez deje el agua caliente en la jeringa.
6. Coloque la jeringa en un lugar fresco sin corrientes de aire, preferiblemente en una bolsa limpia con cierre de cremallera
7. Deje que se enfríe durante varias horas antes de proceder al Procedimiento Dos. Procedimiento Dos: Transferencia de esporas de impresión a la jeringa
1. Primero limpie su área de trabajo. Esto puede implicar limpiar todas las superficies de trabajo con una solución de lejía diluida y rociar el área generosamente con un desinfectante como Lisol.
2. Coloque los siguientes materiales en su guantera o en la superficie de trabajo limpia y desinfectada: El vaso de chupito, sus jeringas refrigeradas, la botella de alcohol, una toalla de papel, su impresión (aún en una bolsa con cierre hermético) y el encendedor o llama de alcohol.
3. Lávese las manos con jabón antibacteriano antes de continuar.
4. Dobla la toalla de papel en ¼ secciones y empapa una esquina con el alcohol.
5. Con la toalla empapada en alcohol, limpie el interior del vaso de chupito, esencialmente esterilizando la superficie que está a punto de usar en la transferencia. Deje que el vaso de chupito se seque al aire, solo debe tomar unos segundos.
6. Retire el protector de la aguja de la jeringa estéril y esterilice la aguja con llama. Luego, tome su toalla de papel empapada en alcohol y limpie la aguja para ayudar aún más en la esterilización. Trate de evitar que la aguja toque cualquier otra superficie a menos que se le indique lo contrario.
7.NOTA: en este punto, es importante trabajar lo más rápido posible para ayudar a combatir las posibilidades de que el moho y las bacterias contaminantes caigan en su área de trabajo y, por lo tanto, arruinen su jeringa.
8. Retire la impresión de su bolsa de almacenamiento. Desdoblarlo para exponer las esporas. Comience a raspar ligeramente, utilizando la aguja de la jeringa, una sección de la huella en el vaso de chupito. Para una impresión de tamaño mediano, generalmente es adecuado raspar una sección no mayor a 1/5 del total de la impresión.
9. Tendrá una pequeña colección notable de esporas en el vaso de chupito. Ahora no exprima más de la mitad del agua de la jeringa en el vaso de chupito, removiendo ligeramente las esporas en la solución.
10. Succione la solución de agua de esporas en la jeringa. Es posible que tenga que eliminar un poco más de agua en el vaso de chupito y volver a succionar para ayudar a capturar todas las esporas en la jeringa.
11. Una vez que tenga la solución de esporas de vuelta en la jeringa, debe notar que el agua en el interior se ha teñido ligeramente y puede ver pequeños grupos de esporas flotando en la solución. Esto es bueno, has completado el proceso.
12. Esterilice la aguja de nuevo con la toalla de papel empapada en alcohol, vuelva a colocar el protector de la aguja y vuelva a colocar la jeringa en su bolsa limpia con cierre hermético.
13. Deje reposar la jeringa durante no menos de 12 horas antes de usarla en microscopía o inoculación para variedades comestibles. Cuanto más vieja sea la huella utilizada, más» deshidratadas » se volverán las esporas. Para una observación o germinación microscópica adecuada, se deberá permitir que las esporas se rehidraten.