Descripción
El reactivo de Thermo Scientific Pierce Ellman (DTNB) reacciona con grupos sulfhidrilo para producir un producto coloreado, proporcionando un método confiable para medir cisteínas reducidas y otros sulfhidrilos libres en solución.El reactivo de Ellman (5,5 ‘ -ditio-bis -) se utiliza para estimar grupos sulfhidrilo en una muestra comparándolos con una curva estándar de un compuesto que contiene sulfhidrilo, como la cisteína. Alternativamente, los grupos sulfhidrilo se pueden analizar utilizando el coeficiente de extinción de TNB (14,150 M-1 cm-1 a 412 nm). El reactivo de Ellman se ha utilizado para aplicaciones distintas de la estimación de sulfhidrilo, como para determinar alquiltioles por HPLC utilizando un procedimiento de derivatización pre-columna y para estudiar tioles en el sitio activo de varias enzimas.Características del reactivo de Ellman: * Ensayo de sulfhidrilo-reacciona cuantitativamente con grupos sulfhidrilo libres (reducidos) (—SH) para obtener un producto TNB detectable• Detección colorimétrica: el producto coloreado permite la medición espectrofotométrica en cubetas o microplacas (λmax = 412nm; ε = 14,150 / M• cm)
• Método probado: la química bien caracterizada proporciona cuantificación de grupos sulfhidrilo de péptidos o proteínas utilizando el cálculo del coeficiente de extinción o en comparación con un estándar de cisteína
Propiedades del reactivo
• Nombres alternativos: DTNB, Reactivo de Ellman
• Nombre químico: 5,5’—ditio-bis-(ácido 2-nitrobenzoico)
• Reactivo hacia: Grupos sulfhidrilo (- SH)
• Fórmula química: C14H8N2O8S2
• Número CAS: 69-78-3
• Peso molecular: 396.35
* Formulario: El polvo cristalino amarillo
DTNB reacciona con un grupo sulfhidrilo libre para producir un disulfuro mixto y ácido 2-nitro-5-tiobenzoico (TNB). El objetivo de DTNB en esta reacción es la base conjugada (R—S-) de un grupo sulfhidrilo libre. Por lo tanto, la velocidad de esta reacción depende de varios factores: (1) el pH de la reacción, (2) el pKa’ del sulfhidrilo y (3) los efectos estéricos y electrostáticos. TNB es la especie coloreada producida en esta reacción y tiene un alto coeficiente de extinción molar en el rango visible. El coeficiente de extinción molar de TNB fue reportado originalmente por Ellman (1959) para ser de 13,600 M-1 cm-1 a 412 nm y pH 8.0. En consecuencia, este valor ha sido citado con frecuencia en la literatura. Estudios posteriores han demostrado, sin embargo, que el coeficiente de extinción molar se refleja con mayor precisión en un valor de 14,150 M-1 cm-1 a 412 nm. La extinción del TNB no se ve afectada por cambios en el pH entre 7,6 y 8,6. Sin embargo, la extinción del TNB es diferente en otros disolventes.