Introducción
La co-inmunoprecipitación, en resumen, es una técnica ampliamente aplicada para identificar interacciones proteína-proteína fisiológicamente relevantes mediante la utilización de anticuerpos específicos de proteínas diana para capturar indirectamente proteínas que se unen a esta proteína diana específica. Como extensión de IP, Co-IP puede capturar y purificar no solo el objetivo primario, sino también otras macromoléculas que se unen al objetivo mediante interacciones nativas. La diferencia entre la propiedad intelectual y la propiedad intelectual conjunta es el objetivo del experimento. La IP se centra en el objetivo principal, que se une al anticuerpo. Mientras que, Co-IP se dirige a los objetivos secundarios, que interactúan con las proteínas primarias, en lugar de anticuerpos. Después de la inmunoprecipitación, las proteínas atrapadas en las perlas se lavan y eluyen para obtener proteínas objetivo primarias y secundarias purificadas. Estas proteínas objetivo se pueden caracterizar en varios métodos, como el análisis de manchas occidentales y espectros de masa bajo estrategia de escopeta, para identificar identificaciones de proteínas asociadas, afinidades de unión, cinética de unión y funciones no descubiertas de la proteína primaria.
Factores críticos sobre la Co-IP:
Como una técnica poderosa, la Co-IP es utilizada regularmente por los bioquímicos para explorar las interacciones proteína–proteína. Si bien la metodología Co-IP es sencilla, identificar las interacciones fisiológicas proteína-proteína a través de la reacción Co-IP no es fácil, debido a la inestabilidad de la interacción, la unión inespecífica a los reactivos IP y la contaminación de anticuerpos. Todos los problemas anteriores pueden tener efectos negativos en la detección de interacciones proteína-proteína.
Co-IP de complejos proteicos
Dado que Co-IP depende de las interacciones proteína-proteína para detectar las proteínas unidas, la afinidad de unión y la estabilidad de las interacciones fisiológicas durante todo el proceso Co-IP es muy importante. Un tiempo de unión inadecuado y largos pasos de lavado pueden reducir la eficiencia de unión y causar un fallo en la detección de la interacción de proteínas. Por lo tanto, para las proteínas, que se prevé que tengan afinidad de unión semanal o interacciones dinámicas, es necesaria la estabilización anticipada de las interacciones proteína-proteína, por ejemplo, se pueden realizar procesos de reticulación antes de la Co-IP.
Interacciones inespecíficas
La rotura de la membrana celular y los orgánulos causa la liberación de gran cantidad de proteínas, que están separadas por el límite, para entrar en contacto. Por lo tanto, es inevitable que se produzcan interacciones inespecíficas, es decir, interacciones falsas positivas, que interfieran con el análisis de los datos. Esto es especialmente común para las proteínas que tienen regiones desplegadas o flexibles, que son relativamente pegajosas y se unen inespecíficamente a otras proteínas. Formas de revivir tales problemas pueden ser la pre-liberación de lisado usando anticuerpos primarios para eliminar proteínas inespecíficas, y cambiando la fuerza iónica del tampón para reducir la unión inespecífica.
La proteómica creativa puede proporcionar un diseño experimental personalizado y refinar los parámetros Co-IP en función de las necesidades de los clientes. Prometemos un análisis Co-IP fiable de las interacciones proteína-proteína con nuestros experimentados científicos y técnicos.
Características del servicio Co-IP:
- Estudiar las interacciones entre proteínas y complejo de proteínas
- Monitorear la dinámica de la interacción de proteínas
- Estudiar la interacción proteína-proteína en una condición no desnaturalizante, que es casi fisiológica
- Mapear los dominios de interacción de proteínas
Nuestro servicio Co-IP contiene:
- Diseño de experimentos basado en las necesidades específicas de su proyecto: tampones, cuentas, anticuerpos, etc.
- Optimización de parámetros, como tiempo de enlace
- Lisis de células, IP, lavado& elución
- Espectrometría de masas/ manchas occidentales, dependiendo de las necesidades del proyecto
- Análisis de datos& entrega de informes
Procedimiento de pedido:
