Resistencia inducible a la clindamicina en los estafilococos se pueden detectar mediante el método de difusión de discos utilizando discos de clindamicina y eritromicina. La prueba D se realiza por difusión de disco, colocando un disco de eritromicina de 15 µg cerca de un disco de clindamicina de 2 µg en una placa de agar que ha sido inoculada con un aislado estafilocócico; la placa se incuba durante la noche.
Aplanamiento de la zona de inhibición alrededor del disco de clindamicina proximal al disco de Eritromicina (que produce una zona de inhibición con forma de letra D) se considera un resultado positivo e indica que la Eritromicina ha inducido resistencia a la clindamicina (una «prueba de zona D»positiva). En el caso de aislados resistentes a la eritromicina, las pruebas de inducción pueden ayudar a los laboratorios a determinar si los resultados de la clindamicina deben notificarse como susceptibles (cuando la prueba de inducción es negativa) o resistentes (cuando la prueba de inducción es positiva).
Mecanismo de Acción de la eritromicina y la Clindamicina y Desarrollo de Resistencia
La eritromicina (un macrólido) y la clindamicina (una lincosamida) representan dos clases distintas de agentes antimicrobianos que inhiben la síntesis de proteínas al unirse a las subunidades ribosómicas 50 de las células bacterianas. En estafilococos, la resistencia a ambos agentes antimicrobianos puede ocurrir a través de la metilación de su sitio diana ribosomal. Esta resistencia suele estar mediada por genes erm.
Importancia clínica de la resistencia inducible a la clindamicina: La resistencia a la macrólida-lincosamida-estreptogramina B (MLSB), mediada por el mecanismo de modificación del lado diana, da lugar a resistencia a la Eritromicina, la Clindamicina y la estreptogramina B. Este mecanismo puede ser
- Constitutivo, donde siempre se produce la ARNr metilasa,
Si se realizan pruebas in vitro, los aislados de Staphylococcus aureus con resistencia constitutiva son resistentes a la Eritromicina y la Clindamicina. - O puede ser inducible, donde la metilasa se produce solo en presencia de un agente inductor (Nota: La eritromicina es un inductor eficaz de resistencia a macrólido-lincosamida-estreptogramina B (MLSB)). Los aislados con resistencia inducible son resistentes a la eritromicina, pero parecen susceptibles a la clindamicina en las pruebas de rutina por invitación.
Importancia clínica de la prueba de resistencia inducible a la clindamicina (Prueba D)
La clindamicina es un agente atractivo para la terapia empírica para las infecciones sospechosas de S. aureus debido a sus excelentes propiedades farmacocinéticas y farmacodinámicas. Se han documentado fracasos clínicos de la terapia con clindamicina para el tratamiento de infecciones por SARM en cepas sensibles a la clindamicina pero resistentes a la eritromicina. Los fallos se debieron a la resistencia inducible a la clindamicina.
En tales casos, In vivo, la terapia con clindamicina puede seleccionar mutantes erm constitutivos, lo que puede conducir al fracaso clínico. La resistencia a la clindamicina puede ser constitutiva o inducible. Las pruebas de susceptibilidad a los antibióticos de rutina no pueden identificar estas cepas. La prueba D (resistencia inducible a la clindamicina) se emplea para detectar resistencia inducible a la clindamicina.
Procedimiento para la Prueba de Resistencia Inducible a la Clindamicina (D):
- Prepare 0.5 Suspensión estándar McFarland de aislados de Staphylococcus aureus resistentes a Eritromicina
- Hacer un cultivo de bacterias en el césped en placas de Agar Muller Hinton (MHA).
- Colocar discos de clindamicina (2 µg ) y eritromicina (15 µg ) con una separación aproximada de 15 mm (medida de borde a borde).
- Incubar la placa durante 16 a 18 horas a 37oC
Interpretación del resultado de la prueba D
Una zona de inhibición en forma de D clara alrededor del disco de Clindamicina se designa como el fenotipo D, que se etiqueta como D o D+. Otros cuatro fenotipos no inductivos (designados como negativos , zona D nebulosa , resistentes y susceptibles ) también se observan en los resultados de difusión en disco