leírás
A Thermo Scientific Pierce Ellman-reagens (Dtnb) szulfhidrilcsoportokkal reagálva színes terméket eredményez, megbízható módszert biztosítva az oldatban lévő redukált cisztein és más szabad szulfhidrilek mérésére.
Ellman reagensét (5,5′-ditio-bisz-) a mintában lévő szulfhidrilcsoportok becslésére használják, összehasonlítva egy szulfhidriltartalmú vegyület, például cisztein standard görbéjével. Alternatív megoldásként a szulfhidrilcsoportokat a TNB kihalási együtthatója (14 150 M-1 cm-1 412 nm-en). Ellman reagensét a szulfhidrilértékeléstől eltérő alkalmazásokhoz használták, például alkiltiolok HPLC-vel történő meghatározására oszlop előtti derivatizációs eljárás alkalmazásával, valamint tiolok vizsgálatára számos enzim aktív helyén.
jellemzői Ellman reagens:
• Sulfhydryl assay-reagál mennyiségileg szabad (redukált) szulfhydryl csoportok (- SH), így kimutatható TNB termék
* kolorimetriás detektálás-színes termék lehetővé teszi spektrofotometriás mérés küvetták vagy mikrolemezek (6max = 412nm; 64,150/M·cm)• bizonyított módszer—jól jellemzett kémia nyújt mennyiségi peptid vagy fehérje szulfhidrilcsoportok alkalmazásával kihalás együttható számítás vagy összehasonlítva egy cisztein standard reagens tulajdonságok• Alternatív nevek: DTNB, Ellman reagens
• Kémiai név: 5,5′-ditio-bisz-(2-nitrobenzoesav)• reaktív felé: szulfhidrilcsoportok (- SH)
• kémiai képlet: c14h8n2o8s2• CAS—szám: 69-78-3• molekulatömeg: 396,35• forma: Sárga kristályos por
A DTNB szabad szulfhidrilcsoporttal reagálva kevert diszulfidot és 2-nitro-5-tiobenzoesavat (TNB) eredményez. A dtnb célpontja ebben a reakcióban egy szabad szulfhidrilcsoport konjugált bázisa (R—S -). Ezért ennek a reakciónak a sebessége több tényezőtől függ: (1) a reakció pH-jától, (2) a szulfhidril pKa’ – jától és (3) a szterikus és elektrosztatikus hatásoktól. A TNB az ebben a reakcióban előállított színes faj, amelynek látható moláris kihalási együtthatója magas. A TNB moláris kihalási együtthatóját Ellman (1959) eredetileg 13 600 M-1 cm-1 412 nm-en és pH 8,0-on jelentette. Következésképpen ezt az értéket gyakran említik az irodalomban. Későbbi vizsgálatok azonban kimutatták, hogy a moláris kihalási együtthatót pontosabban tükrözi a 14 150 M-1 cm-1 érték 412 nm-en. A TNB kihalását nem befolyásolja a pH 7,6 és 8,6 közötti változása. A TNB kihalása azonban más oldószerekben eltérő.