Inokulációszerkeszt
a laboratóriumi szakemberek a mintát csíklemezes módszerrel bizonyos szilárd agar lemezekre vagy folyékony tápközegbe oltják be, attól függően, hogy mi az izolálás célja:
- ha csak egy adott baktériumcsoportot, például az A csoport streptococcusot akarunk izolálni egy torokmintából, akkor olyan szelektív táptalajt használhatunk, amely elnyomja a keverékben várható egyidejű baktériumok növekedését (az agarban jelen lévő antibiotikumokkal), hogy csak a baktériumok egy bizonyos csoportját lehessen izolálni a streptococcusokat “kiválasztják”, azaz láthatóan kiemelkednek. A gombák izolálására Sabouraud agar használható. Alternatív megoldásként a streptococcusok és a gram-negatív baktériumok halálos körülményei, mint például a mannit só agar magas sókoncentrációja, elősegítik a bélbaktériumok mintájában jelen lévő staphylococcusok túlélését, és az agarban lévő fenolvörös ph-indikátorként működik, amely megmutatja, hogy a baktériumok képesek-e a mannit fermentálására azáltal, hogy savat választanak ki a közegbe. Más agar anyagokat adnak hozzá, hogy kihasználják a szervezet látható pigment előállítására való képességét (pl. granada közeg a B csoport Streptococcusához), amely megváltoztatja a baktériumtelep színét, vagy hemolízissel oldja fel a vér agart, hogy könnyebben észrevehetők legyenek. Egyes baktériumok, mint például a Legionella fajok, különleges tápanyagokat vagy toxinkötést igényelnek, mint a faszénben, ezért olyan táptalajt kell használni, mint a pufferelt faszén élesztő kivonat agar.
- ha a lehető legtöbb vagy az összes törzset el akarjuk izolálni, különböző tápanyagokat, valamint dúsított táptalajt, például vér-agart és csokoládé-agart, valamint anaerob táptalajt, például tioglikolát-táptalajt kell beoltani. A szaporodás számbavételéhez a baktériumokat fel lehet függeszteni az olvadt agarban, mielőtt az megszilárdulna, majd petri-csészékbe önteni, az úgynevezett ‘pour plate módszer’, amelyet a környezeti mikrobiológiában és az élelmiszer-mikrobiológiában használnak (pl. tejvizsgálat) az úgynevezett ‘aerob lemezszám’megállapításához.
IncubationEdit
miután a mintát beoltották a választott tápközegbe vagy rá, a megfelelő légköri körülmények között, például aerob, anaerob vagy mikroaerofil körülmények között vagy hozzáadott szén-dioxiddal (5%) inkubálják, különböző hőmérsékleti beállításokkal, például 37 C inkubátorban vagy hűtőszekrényben hideg dúsítás céljából, megfelelő fény mellett, például szigorúan papírba csomagolt fény nélkül vagy sötét üvegben scotochromogen mycobacteriumok számára, és különböző ideig, mivel különböző baktériumok szaporodnak különböző sebességgel, változó óráktól (Escherichia coli) hetekig (pl. mycobacteriumok).
rendszeres, soros időközönként laboratóriumi technikusok és mikrobiológusok ellenőrzik a médiát a látható növekedés jeleire, és rögzítik azt. A vizsgálatot ismét olyan körülmények között kell elvégezni, amelyek elősegítik az izolátum túlélését, például anaerob baktériumok számára kialakított anaerob kamrában, valamint olyan körülmények között, amelyek nem fenyegetik a lemezeket néző személyt egy különösen fertőző mikrobával való fertőzéstől, azaz például a Yersinia pestis (pestis) vagy a Bacillus anthracis (anthrax) biológiai biztonsági szekrényében.
IdentificationEdit
amikor a baktériumok láthatóan megnőttek, gyakran még mindig keverednek. A mikroba azonosítása az egyes kolónia elszigeteltségétől függ, mivel a mikroba biokémiai vizsgálata a különböző élettani jellemzőinek meghatározása érdekében a tiszta culture.To készítsen szubkultúrát, az egyik ismét aszeptikus technikával működik a mikrobiológiában, egyetlen kolóniát emel le az agar felületéről egy hurokkal, és az anyagot az agar lemez 4 negyedébe vagy az egészbe csíkolja, ha a kolónia egyedülálló volt, és nem tűnt vegyesnek.
a nyers minta inkubálás előtti Gram-festése vagy a frissen termesztett kolónia anyagának festése segít meghatározni, hogy egy kolónia egyenletesen megjelenő baktériumokból áll-e, vagy keveredik-e, és a baktériumok színe és alakja lehetővé teszi az első morfológián alapuló osztályozást. A klinikai mikrobiológiában számos más festési technikát alkalmaznak bizonyos organizmusokra (savas gyors baktériumfolt a mikobaktériumok számára). Immunológiai festési technikákat, például közvetlen immunfluoreszcenciát fejlesztettek ki olyan orvosilag fontos kórokozókra, amelyek lassan növekednek (Auramin-rodamin folt a mycobacteriumok számára) vagy nehezen növekszenek (például Legionella pneumophila fajok), és ahol a teszt eredménye megváltoztatná a szokásos kezelési és empirikus terápiát.
a baktériumok biokémiai vizsgálata magában foglalja az agarok készletét az injekciós üvegekben, hogy elkülönítsék a mozgékonyat a nem mozgékonyaktól bacteria.In 1970-ben kifejlesztettek egy miniatürizált verziót, az analitikai profil indexet.
sikeres azonosítás pl. a genom szekvenálása és a genomika a tiszta kultúráktól függ.