kísérleti és terápiás orvoslás

Bevezetés

a bronchiális asztma krónikus gyulladásos betegség, amely számos gyulladásos sejtet és mediátort érint. T-sejtek, különösen T helper (Th) 1 és Th2. döntő szerepet játszanak a légúti gyulladás indukciójában asztmás betegeknél (1). A bonyolult immunválaszok képesek indukálni a Th1 hiányt és a Th2 hiperaktivitást, ami ina Th1 / Th2 egyensúlyhiányt eredményez. Ez az egyensúlyhiány elősegíti az immunglobulin (Ig)Esecretiont, és érzékenyíti a mastocyta és az eozinofileket a megváltozott citokin szekréció révén, és allergiás gyulladást és a légutak hiper-érzékenységét okozza (2,3).Az Interferon (IFN)-a-4 és az interleukin (IL) – 4 a tipikus ofTh1 és Th2 citokinek.

asztmában szenvedő betegeknél a tartós léggyulladást az antigént bemutató sejtek (APC) indítják el, amelyek különböző allergéneket integrálnak a T-sejtek jelzésébe és az azt követő immunválaszokat alapozzák meg (4,5).A T-sejtek aktiválásához olyan jelekre van szükség, amelyeket a TCR komplex és a differenciálódási klaszter (CD)28. Az érett dendritikus sejtek (MDC-k) a Ko-stimuláló molekulák magas szintjét fejezik kicd80 és CD86, amelyek a T-sejtek aktiválásához, terjeszkedéséhez és differenciálódásához szükséges jelet adják CD28 (6). Korábbi vizsgálatok kimutatták, hogy a CD80 és CD86 szint emelkedett asztmás betegek (7,8).

az asztmás modelleket vizsgáló korábbi tanulmányokban kimutatták, hogy az MDC-k indukálják a Th2 polarizációt, az IL-4 szekrécióját, az IFN-KB termelését és az eozinofil gyulladás indukálását (9,10). A DCS-ben a CD80 és CD86 leütésének hatásait vizsgáló tanulmányok azonban hiányoznak az asztma vizeletmodelljeiben a T-helper sejtek citokinszekréciójának differenciálódására és citokinszekréciójára.

ebben a vizsgálatban a Ko-stimuláló T-sejtaktivációs jeleket blokkolta a CD80 és Cd86molekula expressziójának elnyomása a DCs-n kis interferáló RNS (siRNS) alkalmazásával, és a CD80 és CD86 leütésének hatását a Th1/Th2 tipikus citokinek expressziós szintjeire IFN-6 és IL-4 értékelték. Így a cd80 és a CD86 potenciálját az RNS interferencia (RNAi) alkalmazásának célpontjaként vizsgálták az asztma terápiás célzásában.

anyagok és módszerek

állatok

összesen 20 egészséges specifikus kórokozó-mentes gradeBALB / c egerek (6-8 hét; átlagos súly, 18 db 2 g) vásároltaka Sun Yat-Sen Egyetem kísérleti állatainak központja (Guangzhou, Kína). A kísérleteket a következők szerint végeztüka Sun Yat-SenUniversity állatkísérleti Bizottsága által jóváhagyott protokollok.

Asztmamodellek

összesen 20 egeret osztottunk véletlenszerűen két csoportba: i) az asztmás csoport, és ii) a normál kontroll group.In az asztmás csoport, minden egeret érzékennyé tettek ovalbumin(OVA; Sigma-Aldrich, utca. Louis, MO, USA) intraperitoneálisan az 1., 14. és 21. napon, 100 db, 20 mg timsóban emulgeált petesejttel(Guangzhou Chemical Reagent Co., Guangzhou, Kína). Ezt követően az egereket 5% petesejt aeroszolos kihívásnak tették ki 30 percig/nap légmentesen lezárt tartályokban (50 60 50 50 cm méretekkel) a 28-34. A normál kontrollcsoportban az egereket a fentiek szerint szenzibilizáltuk, és a PETESEJTFEHÉRJE-oldat helyett ekvivalens mennyiségű sóoldattal küszködtünk. Az utolsó kihívás után 24 órával az egereket egy jóváhagyott nyaki diszlokációs eljárással áldozták fel, amelyet képzett és teljesen képzett személyzet végzett. A tüdőket eltávolítottuk, majd 10% – os etanolban rögzítettük 24 órán keresztül.a mintákat dehidratáltuk, paraffinba ágyaztuk, és hematoxilinnel és eozinnal festettük a korábban leírtak szerint (11). Patológiás változások a hörgőkben ésa tüdő szöveteit egy Nikon Eclipse Ti fénymikroszkóp alatt értékelték (Nikon Corporation, Tokió, Japán).

A csontvelő-származékok elválasztása

az összes egeret 24 órával a végső kihívás után nyaki diszlokációval áldozták fel. A csontvelőt a thefemurs-ból és a tibiae-ból rpmi-1640 táptalajjal (Gibco; ThermoFisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA). A 250 db 5 percig tartó centrifugációt követően a sejteket vörösvérsejtes (RBC) lízis pufferrel (CWBio Co., Kft., Beijing, Kína), foszfátpufferelt sóoldattal (PBS) mosva, 250 db gfor 5 percig centrifugálva, rekombináns egér granulocita makrofág kolónia-stimuláló faktorral (rmgm-CSF;Peprotech, Inc.) kiegészítve rpmi-1640-ben tenyésztve., Rocky Hill, NJ, USA; 10 ng/ml), és rmil-4(Peprotech; 10 ng/ml) használtuk viszont. 6 napos tenyésztés után 1 ~ g/ml lipopoliszacharidot (LPS; Sigma-Aldrich) adtunk hozzá, majd a nem tapadó MDC-ket a 7.napon betakarítottuk. A DC-ket 4 60 percnél fluoreszcein izotiocianát (FITC)-konjugálthamster Anti-CD11c (5 ~ g/ml; 11-0114), phycoerythrin (PE)-konjugált hörcsög anti-CD80 (5 ~ g/ml; 12-0801), FITC-konjugáltrat anti-CD86 (5 ~ g/ml; 11-0862) és PE-konjugált patkány anti-CD majorhistocompatibility Complex (MHC) II (5 db/ml; 12-5322; allebioscience, Inc., San Diego, CA, USA) monoklonális antitestek, ésezt követően áramlási citometriával (BD FACSVerse; BDBiosciences, Franklin Lakes, NJ, USA) a jelölt antigén expresszió pozitív expressziós sebességének meghatározása érdekében.

siRNS és transzfekció

A CD80-at és CD86-ot célzó specifikus siRNS szekvenciákat (I. táblázat) A Gu et al(12) módszereinek megfelelően terveztük és választottuk ki. Az összes siRNA-t megvásároltákshanghai GenePharma Co., Kft. (Sanghaj, Kína). A transfectionstep – et a gyártó forlipofectamine 2000 protokollja szerint hajtottuk végre (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.).Röviden, A DC-ket egy 24 lyukú szövettenyésztő lemezen tenyésztettük, a transzfekciót megelőző napon 1-105 sejt/kút adenzitás mellett. Lipid-siRNS komplexek előállítása, 3 db 2000 db Lipofektamin 50 db Opti-MEM-ben (Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc.) szobahőmérsékleten 5 percig, és a jelzett siRNS-ből 12 ~ L-t egyidejűleg 50 ~ ~ Opti-Memmel kombináltunk. A hígított lipofektamin 2000-et és az siRNS-t ezután összekeverjük, és szobahőmérsékleten további 20 percig inkubáljuk a komplex képződéshez.Ezt követően a komplexet a DCs-vel inkubáltuk egy 24 kútlemezen, 37 Kb-nál, 5% – os párásított Co-ban2 a levegő atmoszférájában6 h. amikor a kotranszfekciót elvégeztük, ekvivalens mennyiségű cd80 siRNS:Lipofectamine 2000 és CD86 siRNS:Lipofectamine 2000komplexeket adtunk minden kúthoz. A FAM-scrambled-siRNA – t használtáknegatív kontroll a transzfekciós hatékonyság meghatározása érdekében. A transzfektált DCs három csoportját hozták létre: a nem siRNS csoportban csak a Lipofektamin 2000-et adták hozzá, anélkül, hogy anysirnát adtak volna a DCs-hez. A siRNS csoportban az MDC – ket CD80-és CD86-specifikus siRNS-ek fertőzték meg. A negativesiRNA csoportban az MDC-ket nem specifikus, nem célzott fam-siRNS transzfektálta, amelynek nincs homológiája a célzott RNS-ekkel.A kísérleteket minden minta esetében három példányban végeztük.A transzfekciós hatékonyságot fluoreszcenciamikroszkópiával (Nikon Eclipse Ti, Nikon Corporation) határoztuk meg, és byflow citometriával detektáltuk.

fordított transzkripció-kvantitatív polimeráz láncreakció (RT-qPCR)

a CD80 és CD86 mRNS expressziós szintek értékelésea transzfekciót követően RT-qPCR-t végeztünk. A Primer szekvenciákat (II. táblázat) a GenBank szerint terveztük és a DaAn Gene Co., Kft. a Sun Yat-SenUniversity (Guangzhou, Kína). 24 órával a transzfekciót követően az 1 606 DCS teljes RNS-jét extraháltuk TRIzol reagenssel (Invitrogen;Thermo Fisher Scientific, Inc. a QuantiTect SYBR Green RT-PCR kit (Qiagen GmbH,Hilden, Németország) segítségével egy Roche LightCycler 480-ban (Roche Diagnostics,Basel, Svájc). Az erősítéseket a gyártó QuantiTect SYBR Green RT-PCRkit (Takala, Japán) protokolljának megfelelően végeztük. Az amplifikációs feltételek 40 ciklus volt: 93 C 6 perc, 93 C 30 másodperc, 55 C 45 másodperc, 72 C 45 másodperc. minden mintát mindhárom kútba beadtunk. Relativegene expression levels were calculated using the quantificationcycle (Cq) method with normalization to glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase (GAPDH) as the reference gene using 2−∆∆Cq(13).

áramlási citometria

a CD80 andcd86 pozitív expressziós sebességének kimutatására a Transzfekciót követően az áramlási citometriát az MHC II/CD11c kapun végezték CD80 és CD86 esetében. Hat órával a transzfekció után a DCs-t kétszer mossuk PBS-sel, majd fluoreszcensen jelölt antitesttel inkubáljuk 4CC-n 30 percig.Ezt követően a sejteket ismét PBS-sel mostuk és 10 g/l paraformaldehiddel rögzítettük. A következő anti-egér monoklonalantitesteket használtuk: PE-anti-MHC II, FITC-Anti-CD11c, PE-anti-CD80 és FITC-anti-CD86, mint már említettük. Az összes áramláscitometriai elemzést IgG izotípusos kontrollokkal végeztük.

T-sejt elválasztás

A lépeket eltávolítottuk, miután az egereket a nyaki diszlokáció okozta. A T-sejteket a gyártó protokollja (Dakewe Biotech Co., Kft., Kína). A sejtsűrűséget a további feldolgozás előtt 1 609/l-re állítottuk be.

vegyes lymphocyta reakció (MLR)

az asztmás egér csontvelőből származó DC-ket(1 604/kút) és az egészséges T-sejteket (1 105 / kút) 96 kútlemezen 1:10 arányban tenyésztettük együtt. A Ko-tenyésztési rendszereket három csoportra osztottuk: i) a nem siRNS-csoport, ii) a siRNS-csoport, ésii) a negatív siRNS-csoport, a fent leírt megfelelő csoportok DCs-jével. Ezután minden egyes kúthoz petesejteket adtunk 10 mg/l végső koncentrációig, 200 6L össztérfogatban. A sejteket 37ccc-n inkubáltuk 5% – os párásított Co-ban2 levegő atmoszférában 72 órán keresztül.

enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálatok(ELISAs)

3 napos társkultúra után a felülúszót összegyűjtötték. Az IFN-6 és az IL-4 szinteket az IFN-6 és IL-4 specifikus Elisa-készletekkel elemeztük (Dakewe Biotech Co., Kft.) a gyártó utasításai szerint. Az abszorbancia értékeket 450 nm-en olvastuk egy Multiskan MK3 (Thermo Fisher Scientific, Inc.).

statisztikai elemzés

statisztikai elemzéseket végeztünk SPSSsoftware, version 13.0 (SPSS, Inc., Chicago, IL, USA). Az adatokatjelen van, mint az átlagos standard deviáció (SD). A vizsgálatokat minden egér esetében három példányban végezték el. A csoportok közötti statisztikai összehasonlításokat egyirányú varianciaanalízissel,a csoporton belüli összehasonlításokat pedig Student ‘ st-teszt segítségével végeztük. A csoportok közötti különbségeket statisztikailag figyelembe vettükjelentős, ha P< 0,05.

eredmények

asztmás modell

a 20 egészséges SPF-fokozatú BALB / c egeret asztmás és normál kontrollcsoportba rendelték, mindegyikben 10 egeret. Az Allmice-t végső soron kísérlet nélkül értékeltükállati veszteség. A tüdőszövet patológiája szerint a petesejtekkel immunizált egerekből származó tüdőszakaszok egyértelmű légúti gyulladást mutattak peribronchioláris és perivaszkuláris infiltrátumokkal. Ezek az infiltrátumok túlnyomórészt eozinofilekből és lymphocytákból álltak,és a szekciók bronchiális nyálkahártyát és simaizmok megvastagodását, fokozott nyálkaszekréciót, légúti hámsejtek ürülését, légutak stenosisát és a tüdőinterstitiumban szétszórt gyulladásos sejteket mutattak. Nem figyeltek meg jelentős patológiai változásokattüdőszakaszok a normál kontrollcsoportból. Képviselőhisztopatológiai adatok ábrán látható.1.

Cell surface molecule expression byymdcs

A CD11c, CD80 és CD86 expressziós szintjeit fluoreszcens aktivált sejtválogatással(FACS) detektáltuk. az asztmás csoport MDC-jei a CD11c-t a normál kontrollcsoportéval összehasonlítható szinten fejezték ki; a két csoport között nem találtak szignifikáns különbséget (P>0,05). A normál kontrollcsoporthoz képest azonban az asztmás csoport szignifikánsan magasabb CD80 és CD86 expressziós szintet mutatott (P<0,05; ábra. 2).

MDC – K Transzfekciója

A CD80-és CD86-specifikus siRNS-konstrukciókat sikeresen átvittük az mDCs-be. A transzfektált MDC-ket fluoreszcens mikroszkóp alatt figyelték meg 6 órával a transzfekció után.A FACS által kimutatott siRNS transzfekciós hatékonysága ~75% volt(ábra. 3).

mRNS és a cd80 és CD86 fehérje expressziója MDC-k által transzfekciót követően

A transzfektált MDC-kben a CD80 és cd86 mRNS és fehérje expressziós szintjét RT-qPCR és Facsanalízissel detektáltuk 24, illetve 72 órán át a transzfekciót követően. A CD80and CD86 mrns expressziós szintjét által észlelt RT-qPCR jelezte, thatCD80 mrns expressziós szintje a nem siRNA, siRNA, valamint negativesiRNA csoportok voltak 2.09±0.46, 0.60±0.17, valamint 2.04±0.93,illetve a CD86 mrns expressziós szintje 3.58±0.20,0.91±0.48, valamint 2.83±0.83, ill. A által szolgáltatott adatok FACSindicated, hogy a CD80 fehérje pozitív kifejezés árak a thenon-siRNA, siRNA, mind a negatív siRNA csoportok voltak 82.45±15.80,30.79±7.07, valamint 81.83±10.07% – kal, a CD86 proteinpositive kifejezés árak voltak 89.45±10.22, 27.29±6.99, and87.66±11.74%, ill. Az mRNS expressziós szint és a proteinpozitív expressziós arány hasonló eredményeket mutatott. Nem volt szignifikáns jelentősége a nem siRNS csoport és a negatív siRNS csoport között (P >0,05). A CD80 és CD86 expressziója a RNS és a fehérje szintjén a siRNS csoportban jelentősen csökkent, összehasonlítva a nem siRNS és a negatív siRNS csoportokéval (P<0,05; füge. 4.és 5.). Ez azt mutatja, hogy az siRNS-célzott interferencia jelentősen elnyomhatja a CD80 és CD86 mRNS és a fehérje expressziós szintjét.

IFN-apostolok és IL-4 szekréció a T-sejtek által, MDC-vel tenyésztve

72 órás Ko-tenyésztés után az mDC felülúszójában és a T-sejt Ko-tenyésztési rendszerben az IFN-apostolok és IL-4 szinteket ELISA-val detektálták. IFN-γ kifejezés volt, jelentősen nőtt a siRNA csoport (132.73±25.04 pg/ml), mint thenon-siRNA, mind a negatív siRNA csoportok (72.56±26.30, valamint 80.21±24.42 pg/ml; P<0.05), míg a nem jelentős differenceswere észlelt között a nem siRNA, mind a negatív siRNA csoportok(P>0.05). Az IL-4 expressziós szintek jelentősen csökkentek az siRNS-csoportban (93,04 ~ 23,13 pg/ml), összehasonlítva a nem sirna-és negatív siRNS-csoportokkal (150,69 ~ 29,50 és 163,19 ~ 25,36 pg/ml; P<0,05), míg a nem siRNS-és a negatív siRNS-csoportok között nem volt szignifikáns különbség(p>0,05; ábra. 6).

Vita

a bronchiális asztma egy krónikus gyulladásos légúti betegség, amely számos gyulladásos sejtet érint, beleértve a mastcellákat, az eozinofileket, a limfocitákat és más sejtkomponenseket (14-17).A Th1 / Th2 egyensúlyhiány kulcsfontosságú tényező, amely hozzájárul az asztma súlyosságához (18). Az APC-k,köztük a DCs-k, a makrofágok és a B-sejtek (19) döntő szerepet játszanak a T-sejtek stimulálásában (3). Ezek közül a DC a legerősebbapc, amely hozzájárul az elsődleges és másodlagos immunválaszokhoz, beleértve az allergiás immunitást is. A cd80 és CD86 Ko-stimuláló molekulák expressziójának magas szintjével rendelkező Érett DCs (MDC) képes aktiválni a T-sejteket, míg az alacsony cd80 és CD86 expressziós szinttel rendelkező éretlen dendritikus sejtek (IDC-k) elnyomják a T-sejt válaszát és immuntoleranciát indukálnak (20,21). Kimutatták, hogy az asztmás dcsin betegek hiperaktívak (22).

a CD80 és a CD86 kétféle fehérje, amelyek az APC felületén expresszálódnak, és amelyek párhuzamosan működnek a T-sejt aktiválásához és a túléléshez szükséges Eco-stimulációs jelek biztosításában. Korábbi tanulmányok kimutatták, hogy a cd80 és CD86 Ko-stimuláló molekulák expressziós szintje az mDC felületén szorosan összefügg a Th2-sejt reakcióval és a légúti gyulladással (23,24). Asztmás betegeknél az MDC-k, amelyek erősen expresszálják a CD80-at és a CD86-ot,stimulálhatják a na 6V CD4+helper T-sejt aktivációt a Th2 sejtek felé történő differenciálódás érdekében, ami Th1/Th2 egyensúlyhiányt eredményez. Ezt követően a Th1 citokinek, mint például az IFN-6, elégtelen szekréciója, valamint a Th2 citokinek, például az IL-4 és az IL-5 fokozott szekréciója eozinofil gyulladást és allergiás légúti gyulladást okoz(10,24,25). Két jelre van szükség a Th2-sejtek aktiválásának elősegítéséhez (26-28). Az első jelantigén-MHC komplexek képződése az mDC felületén, amelyek specifikusan kötődnek a T-sejt receptor-CD3 receptor komplexhez a T-sejt felületeken, a második jel pedig Ko-stimuláló molekula expresszió és funkcionális aktiváció az mDC felületeken, amelyek specifikusan kötődnek a na-sejtek receptoraihoz; a két jel egy KO-stimulatorypathway-t képez (29). Azt is felvetették, hogy van egy harmadik jel (30), mivel a DCs által termelt bizonyos sejtmolekulák, például a thymic stromal lymphopoietin (TSLP) befolyásolják a Th-sejtek differenciálódásának irányát. Az előbb említett jelek közül azonban a CD80/CD86-CD28 co-stimulatory pathway a legklasszikusabb és legfontosabb. Korábbi kutatások azt mutatták, hogy a CD80/CD86-CD28 kostimuláló út hatékony lehet az asztma kezelésében annak bemutatásával, hogy a cdd80 / CD86 kostimuláló út blokkolása monoklonális antitest megközelítésekkelgátolhatja a gyulladást asztmás egerekben (25). Ezenkívül a CD80/CD86co-stimuláló út antiszensz oligonukleotidokkal történő elnyomása elnyomhatja a légúti hiperaktivitást (31).

az RNSi egy géncsendesítő jelenség, ahol az endogén-vagy exogén – specifikus kettős szálú RNS-ek kiváltják a homológ mRNS lebontását, és indukálják a megfelelő funkcionális fenotípusok elvesztését. Amióta a technikát 1998-ban Fire et al (32) felfedezte, a technika továbbfejlődött, hogy magas fokú specificitást és hatékonyságot érjen el. Az Rnaitechnológia terápiás alkalmazása olyan téma, amely az elmúlt években nagy érdeklődést váltott ki az alapvető orvosi és klinikai kutatások iránt.Az RNSi képessége a virulens génexpresszió gátlásáraszéles körben alkalmazzák különféle betegségek kezelésére (33-35).Számos tanulmány arról is beszámolt, hogy az RNS-t indc-kben lehet használni a bronchiális asztma diagnosztizálására és kezelésére (36-39).Darcan-Nicolaisen et al (40) felfedezte, hogy az allergiás asztma két fő jele aova-indukált asztma egér modell, amelyek légúti gyulladás éshiperaktivitás, szignifikánsan enyhítették a jelátalakítóval és a transzkripció aktivátorával 6 (STAT6) hangtompítás az airwayepithelialis sejtekben siRNS orrcseppek beadásával.Moriwaki et al(41) kimutatta, hogy a citokin jelátviteli 3 (SOCS3) géncsendesítés siRNS által közvetített szuppresszora elnyomhatja a légúti reaktivitást éseozinofil infiltrációt, amelyet allergiás stimuláció indukált asztmás egerekben. Zheng et al (42) megállapította, hogy az siRNS alkalmazása képes volt gátolni a tirozin protein kináz (TPK) gén expresszióját az asztmás egerek DCs-jében, elnyomva a DC-k mint antigént bemutató sejtek funkcionális képességét, ezáltal gátolva a T-sejtaktivációt és a differenciálódást. Azonban a siRNS által közvetített CD80 és CD86 leütésének a DCs-ben az asztmás egerekben a T-sejtdifferenciálódásra gyakorolt hatásaira vonatkozó vizsgálatok hiányoznak. A jelen tanulmányban a cd80 és CD86 mRNS és fehérje expressziója az egér bonemarrow-eredetű DCs-ben sikeresen csökkent a CD80 – andCD86-célzott siRNS-sel, ami igazolta az RNS hatékonyságát.

ebben a vizsgálatban egy asztmás egér modell voltamelyet a korábban bejelentett módszerek szerint hoztak létre (43). Az eredmények azt mutatták, hogy az asztmás csoportból nyert MDC-k megnövekedett Cd80 és CD86 expressziós szintet mutattak, ami azt jelenti, hogy a CD80/Cd86 kapacitás fokozódhat asztmás betegeknél. Az MDC – k CD80-és CD86-célzott siRNS-sel való transzfúzióját követően a cd80 és CD86 RNS expressziós szintjei és fehérjepozitív expressziós rátái jelentősen csökkentek, megerősítve, hogy az siRNS-megközelítés gátló hatást gyakorolt a cd80 és CD86 Ko-stimulatorymolekulákra a transzkripciós és transzlációs szinteken. Az MDC-k és a T-sejtek Ko-tenyészetéből származó felülúszóban az RNSi az IFN-6 expressziójának növekedését és az ofIL-4 szintjének csökkenését indukálta, ami azt jelzi, hogy a cd80 és CD86 Ko-stimuláló molekulák expressziójának csökkenése az MDC-kben gyengítette a cdd80/CD86-CD28 Ko-stimulációs útvonalat asztmás egerekben. Az RNSi a Th1/Th2 citokinek expresszióját is befolyásolta, jelezve, hogy az eredeti Th1/Th2 egyensúlyhiány megváltozott, következésképpen immunetolerancia indukálódott. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a CD80 és a Cd86 potenciális célpontjai lehetnek az rnai alkalmazásának az asztma kezelésében, és új utat biztosítanak az asztma génterápiájához.

Köszönetnyilvánítás

ezt a tanulmányt a légzőszervi betegségek állami kulcsfontosságú Laboratóriumának nyílt projektjei támogatták (Guangzhou, Kína) (Támogatás száma: 2007da80154f1107).

	Locksley RM: asztma és allergiás gyulladás. Cella. 140:777–783. 2010. Cikk Megtekintése: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Holgate ST: veleszületett és adaptív immunválaszok asztmában. Nat Med. 18:673–683. 2012. Cikk megtekintése: Google Scholar : PubMed/NCBI
	vörösfenyő M, Robinson DS és Kay AB: A T-limfociták szerepe az asztma patogenezisében. J Allergia ClinImmunol. 111:450–464. 2003. Cikk Megtekintése: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Lambrecht BN és Hammad H: a dendritikus és hámsejtek szerepe az allergiás légutak gyulladásának fő szabályozójaként. Lancet. 376:835–843. 2010. Cikk megtekintése: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Holt PG és Upham JW: a dendritikus sejtek szerepe az asztmában. Allergiás Reakció Immunol. 4:39–44.2004. Cikk Megtekintése: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Lim TS, Goh JK, Mortellaro a, Lim CT,H GmbH és Ricciardi-Castagnoli P: A CD80 és a Cd86differenciálisan szabályozza a T-sejtek mechanikai kölcsönhatásait aantigén-prezentációval dendritikus sejtek és B-sejtek. PLoS Egy.7:. Cikk megtekintése: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Wong CK, Lun SW, Ko FW, Ip WK, Hui DS andLam CW: A CTLA-4, CD28 és CD86 plazma-és sejtfelszín-stimuláló molekulák fokozott expressziója allergiás asztmában szenvedő felnőtt betegeknél. Clin Exp Immunol. 141:122–129. 2005.Cikk megtekintése: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Shi HZ, Xie ZF, Deng JM, Chen YQ és XiaoCQ: oldható CD86 fehérje asztmás betegek szérummintáiban.Mellkas. 59:870–875. 2004. Cikk megtekintése: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Van Rijt LS és Lambrecht BN: Dendritikussejtek asztmában: a szenzibilizáción túlmutató funkció. Clin Exp Allergia.35:1125–34. 2005. Cikk megtekintése : Google Scholar : PubMed/NCBI
	van Rijt LS, Vos N, Willart M, Kleinjan A,Coyle aj, Hoogsteden HC és Lambrecht BN: alapvető szerepe dendritikus sejt CD80/CD86 kostimuláció a Th2 effektor válaszainak indukciója, de nem reaktiválása az asztma egérmodelljében.J Allergia Clin Immunol. 114:166–173. 2004. Cikk Megtekintése: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Wu SG, Wang GL, Li LY és Ji J: a mikroRNS-21 hatása az interleukin 12/jelátalakítóra és a transzkripciós 4 jelátviteli útvonal aktivátorára asztmás egerekben. Cent Eur JImmunol. 39:40–45. 2014. Cikk megtekintése: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Gu X, Xiang J, Yao Y és Chen Z: az RNS interferencia hatása a cd80 és CD86 expresszióra a bonemarrow-eredetű egér dendritikus sejtekben. Scand J Immunol. 64:588–594.2006. Cikk megtekintése: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Livak KJ and Schmittgen TD: a relatívgén expressziós adatok elemzése valós idejű kvantitatív PCR és 2-ons ct módszerrel. Módszerek. 25:402–408. 2001. Cikk megtekintése: Google Tudós : PubMed / NCBI
	Fanta Ch: asztma. N Engl J Med.360:1002–1014. 2009. Cikk Megtekintése: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Lambrecht BN és Hammad H: tüdő dendritikussejtek légúti vírusfertőzésben és asztmában: a védettségtől az immunopatológiáig. Annu Rev Immunol. 30:243–270. 2012. Cikk megtekintése: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Wenzel SE: asztma fenotípusok: Aevolúció a klinikai megközelítésektől a molekuláris megközelítésekig. Nat Med.18:716–725. 2012. ViewArticle: Google Tudós : PubMed / NCBI
	Hansel TT, Johnston SL és Openshaw PJ:mikrobák és nyálkahártya immunválaszok asztmában. Lancet.381:861–873. 2013. Cikk megtekintése: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Compalati E, Braido F és Canonica GW: Anupdate az allergén immunterápiáról és az asztmáról. Curr Opin Pulm Med.20:109–117. 2014. Cikk Megtekintése: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Goyvaerts C, Dingemans J, de Groeve K,Heirman C, van Gulck E, Vanham G, de Baetselier P, Thielemans K,Raes G és Breckpot k: humán antigén-bemutató célzás cella subsets. J Virol. 87:11304–11308. 2013. Cikk megtekintése: Google Tudós : PubMed / NCBI
	Reise Sousa C: dendritikus sejtek egy érettkorban. Nat Rev Immunol. 6:476–483. 2006. ViewArticle: Google Tudós : PubMed / NCBI
	Gill MA: a dendritikus sejtek szerepe az asztmában. J Allergia Clin Immunol. 129:889–901. 2012. Cikk megtekintése: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Shi JH, LI YG és LI TS: a dendritikus sejtek szerepe az antigén bemutatásában és az asztma patogenezisében. Zhonghua Jie He He Hu Xi Za Zhi. 28:22–27. 2005.(Kínai). PubMed / NCBI
	Wong CK, Lun SW, Ko FW, Ip WK, Hui DS andLam CW: a CTLA-4, CD28 és CD86 plazma és sejtfelszín-stimuláló molekulák fokozott expressziója allergiás asztmában szenvedő felnőtt betegeknél. Clin Exp Immunol. 141:122–129. 2005.Cikk megtekintése: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Bellou A and Finn PW: Costimulation:kritikus utak az asztma immunológiai szabályozásában. CurrAllergy Asztma Rep. 5:149-154. 2005. Cikk Megtekintése : Google Scholar: PubMed/NCBI
	Chen YQ és Shi HZ: CD28/CTLA-4-CD80/Cd86és ICO-B7RP-1 kostimulációs út a bronchiális asztmában. Allergia.61:15–26. 2006. Cikk megtekintése: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Bieber T, Novak N, Herrmann N és Koch S:a dendritikus sejtek szerepe az atópiás dermatitiszben: frissítés. Clin RevAllergy Immunol. 41:254–258. 2011. Cikk Megtekintése: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Hespel C és Moser M: az inflammatorydendritikus sejtek szerepe a veleszületett és adaptív immunitásban. Eur J Immunol.42:2535–2543. 2012. Cikk megtekintése: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Novak N: frissítés a humandendritikus sejtek szerepéről atópiás dermatitisben szenvedő betegeknél. J Allergia ClinImmunol. 129:879–886. 2012. Cikk Megtekintése: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Lombardi V, Singh AK és Akbari O: a kostimuláló molekulák szerepe allergiás betegségekben és asztmában. IntArch Allergia Immunol. 151:179–189. 2010. Cikk megtekintése: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Zhang Y, Zhou X és Zhou B: A DC-derivedTSLP elősegíti a Th2 polarizációt az LPS-alapozott allergiás léggyulladásban. Eur J Immunol. 42:1735–1743. 2012. Cikk Megtekintése: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Crosby JR, Guha M, Tung D, Miller DA,Bender B, Condon TP, York-DeFalco C, Geary RS, Monia BP, Karras JGand Gregory SA: belélegzett CD86 antiszensz oligonukleotid szuppresszumoktüdő gyulladás és légúti HIPERREAKCIÓKÉPESSÉG allergiás egerekben. J Pharmacol Exp Ther. 321:938–946. 2007. Cikk megtekintése: Google Scholar : PubMed/NCBI
	tűz A, Xu S, Montgomery MK, Kostas SA, Driver SE és Mello CC: Erős és specifikus genetikai interferencia a Caenorhabditis elegans kettős szálú RNS – ével. Természet.391:806–811. 1998. ViewArticle: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Ghafouri-Fard s: siRNA és cancerimmunotherapy. Immunterápia. 4:907–917. 2012. Cikk megtekintése: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Gavrilov K and Saltzman WM: TherapeuticsiRNA: alapelvek, kihívások és stratégiák. Yale J Biol Med.85:187–200. 2012.PubMed/NCBI
	Yan WJ, Xu SJ, Xie MM és Wu BL: az exogén ciklikus dimer guanosinemonofoszfát hatása a Streptococcus mutans geneexpressziójára. Zhongguo Zu Zhi GongCheng Yan Jiu. 16:1451–1454. 2012.(Kínaiul).
	Lee CC, Huang HY és Chiang BL:a Lentivirális által közvetített interleukin-4 és interleukin-13 Rninterference csökkenti a légúti gyulladást és a hiperreakciót.Hum Gene Ther. 22:577–686. 2011. Cikk Megtekintése : Google Scholar: PubMed/NCBI
	Li Y, Sun M, Cheng H, Li S, Liu L, Qiao H,Hua s és Lu J: az IL-23 expressziójának elnémítása egy kis hajtűvel rnapvédi az asztma ellen egerekben. Exp Mol Med. 43:197–204. 2011.Cikk megtekintése: Google Scholar : PubMed/NCBI
	WOSKA JJ és Gillespie ME:az RBL-2h3 hízósejt degranulációját közvetítő belső pergő komplex kis interferáló RNS-közvetített azonosítása és szabályozása.Scand J Immunol. 73:8–17. 2011. Cikk megtekintése: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Lu XX, McCoy KS, Xu JL, Hu WK és Chen HB:a T-sejt Ig mucin-3-at célzó kis interferáló RNS csökkenti az allergiás légúti gyulladást és a hiperreakciót. Gyulladás.36:582–591. 2013. Cikk megtekintése : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Darcan-Nicolaisen Y, Meinicke H, Fels G,Hegend O, Haberland A, K, Loddenkemper C, Witzenrath M, KubeS, Henke W és hamelmann e: Kis interferáló RNS ellentranszkripciós faktor STAT6 gátolja az allergiás légúti gyulladásés hiperreaktivitás egerekben. J Immunol. 182:7501–7508. 2009.Cikk megtekintése : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Moriwaki A, Inoue H, Nakano T, MatsunagaY, Matsuno Y, Matsumoto T, Fukuyama S, Kan-O K, Matsumoto K,Tsuda-Eguchi M, et al: T-sejtes kezelés kis interferáló rnafor szuppresszorral a citokin jelátvitel 3 modulálja az allergiás légireakciókat az asztma egérmodelljében. Am J Respir Sejt Mol Biol.44:448–455. 2011. Cikk megtekintése: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Zheng YH, Lu JJ, Guo ZL, Ren T és LiangYJ: a lép tirozin kinázra jellemző kis interferáló RNS-ek gátolják az asztmás egerek dendritikus sejtjeinek érését in vitro.Zhongguo Hu Xi Yu Wei Zhong Jian Hu Za Zhi. 8:487–491. 2009.(Kínai).
	Li JG, Zhuansun YX, Ran PX, Zhang W, MoXN, Wu H és Li YQ: A csontvelő mesenchymalis őssejtjeinek hatásai a CD4+ CD25 + szabályozó T-sejtekre és az asztmás egerekben fellépő léggyulladásra. Zhongguo Zu Zhi Gong Cheng Yan Jiu.12:9302–9305. 2008.(Kínaiul).