David A Weitz 'S Lab

Kvantifisering av celle-utskilt molekyler, f. eks cytokiner, er grunnleggende for karakterisering av immunresponser. Cytokin fangstanalyser som bruker konstruerte antistoffer for å forankre de utskilte molekylene til de utskillende cellene, er mye brukt til å karakterisere immunresponser fordi de tillater både sensitiv identifikasjon og gjenoppretting av levedyktige responsive celler. Men hvis cytokinene diffunderer vekk fra de utskillende cellene, vil ikke-utskillende celler også bli identifisert som responderende celler. Her innkapsler vi immunceller i mikrofluidiske dråper og utfører cytokin-fangstanalyser for å begrense diffusjonen av de utskillede cytokinene. Vi bruker microfluidic enheter til raskt å kapsle enkelt natural killer NK-92 MI celler og deres mål K562 celler i microfluidic dråper. Vi utfører IN-droplet IFN-γ fangstanalyser og demonstrerer AT nk-92 MI-celler gjenkjenner målceller i dråper og blir aktivert FOR Å utskille IFN-γ. Dråpeinnkapsling forhindrer diffusjon av utskilte produkter til naboceller og reduserer både falske positiver og falske negativer dramatisk, i forhold til analyser utført uten dråper. I en prøve som inneholder 1% sanne positive, reduserer innkapslingen, fra 94% til 2%, antall sanne positive celler som vises som negativer; i en prøve som inneholder 50% sanne positive, reduseres antall ikke-stimulerte celler som vises som positive fra 98% til 1%. Etter at cellene er frigjort fra dråpene, utskilles cytokin forblir fanget på utskillende immunceller, slik AT FACS-isolering av populasjoner som er sterkt beriket for aktiverte effektorimmunceller. Droplet innkapsling kan brukes til å redusere bakgrunnen og forbedre påvisning av en enkelt celle sekresjon assay.

Legg igjen en kommentar

Din e-postadresse vil ikke bli publisert.