Beskrivelse
Thermo Scientific Pierce Ellmans Reagens (DTNB) reagerer med sulfhydrylgrupper for å gi et farget produkt, og gir en pålitelig metode for å måle reduserte cystein og andre frie sulfhydryler i oppløsning.
Ellmans Reagens (5,5 ‘ – dithio-bis -) brukes til å estimere sulfhydrylgrupper i en prøve ved å sammenligne med en standardkurve av en sulfhydrylholdig forbindelse som cystein. Alternativt kan sulfhydrylgrupper analyseres ved hjelp av utryddelseskoeffisienten TIL TNB (14,150 M-1 cm-1 ved 412nm). Ellmans Reagens har blitt brukt til andre anvendelser enn sulfhydrylestimering, for eksempel for å bestemme alkyltioler VED HPLC ved hjelp av en pre-kolonne derivatiseringsprosedyre og for å studere tioler i det aktive stedet for flere enzymer.
Funksjoner Av Ellmans Reagens:
• Sulfhydrylanalyse-reagerer kvantitativt med frie (reduserte) sulfhydrylgrupper (—sh) for å gi detekterbart TNB-produkt
• Kolorimetrisk deteksjon-farget produkt muliggjør spektrofotometrisk måling i kyvetter eller mikroplater (λ = 412nm; ε = 14,150/M·cm)
• Påvist metode—godt karakterisert kjemi gir kvantifisering av peptid-eller proteinsulfhydrylgrupper ved hjelp av utryddelseskoeffisientberegning eller ved sammenligning med en cysteinstandard
Reagensegenskaper
• Alternative navn: DTNB, Ellmans Reagens
• Kjemisk navn: 5,5′-dithio-bis-(2-nitrobenzoesyre)
• Reaktiv mot: Sulfhydrylgrupper (—sh)
• Kjemisk formel: c14h8n2o8s2
• cas-Nummer: 69-78-3
• molekylvekt: 396,35
• skjema: Gult krystallinsk pulver
dtnb reagerer med en fri sulfhydrylgruppe for å gi et blandet disulfid og 2-nitro-5-tiobenzoesyre (TNB). Målet FOR DTNB i denne reaksjonen er konjugatbasen (R—S-) av en fri sulfhydrylgruppe. Derfor er frekvensen av denne reaksjonen avhengig av flere faktorer: (1) reaksjonen pH, (2) pka’ av sulfhydryl og (3) steriske og elektrostatiske effekter. TNB er den fargede arten produsert i denne reaksjonen og har en høy molar utryddelseskoeffisient i det synlige området. Den molare utryddelseskoeffisienten TIL TNB ble opprinnelig rapportert Av Ellman (1959) til å være 13 600 M-1 cm-1 ved 412 nm og pH 8,0. Følgelig har denne verdien blitt sitert ofte i litteraturen. Senere studier har imidlertid vist at molar utryddelseskoeffisienten reflekteres mer nøyaktig med en verdi på 14.150 M-1 cm – 1 ved 412 nm. Utryddelsen AV TNB påvirkes ikke av endringer i pH mellom 7, 6 og 8, 6. Utryddelsen AV TNB er imidlertid forskjellig i andre løsningsmidler.