Eksperimentell Og Terapeutisk Medisin

Innledning

Bronkial astma er en kronisk inflammatorisk luftveissykdom som involverer mange inflammatoriske celler og mediatorer. T-celler, spesielt t-hjelper (Th)1 Og Th2. har en avgjørende rolle iinduksjon av luftveisbetennelse hos astmapasienter (1). Kompliserte immunresponser er i stand til å indusere Th1-mangel og Th2 hyperaktivitet, noe som resulterer I Th1 / Th2 ubalanse. Denne ubalansen fremmer Immunglobulin (Ig)Esekresjon og sensibiliserer mastocytter og eosinofiler via endret cytokinutskillelse og forårsaker allergisk betennelse og hyperresponsivitet i luftveiene (2,3).Interferon (IFN) – γ og interleukin (IL)-4 er typiske cytokiner for henholdsvis th1 Og Th2.

hos pasienter med astma initieres vedvarende luftveisbetennelse av antigenpresenterende celler (APC), som integrerer ulike allergener i et signal For T-celler og primeretterfølgende immunresponser (4,5).Aktivering av T-celler krever signaler som initieres via theTCR-kompleks og klynge av differensiering (CD)28. Eldre dendriticcells (mDCs) uttrykker høye nivåer av co-stimulatory moleculesCD80 OG CD86, som gir signalet som kreves for å utløse t-celleaktivering, ekspansjon og differensiering viainteraction MED CD28 (6). Tidligere studier har vist AT CD80-og CD86-nivåene er forhøyede pasienter med astma (7,8).

i tidligere studier som undersøkte astmamodeller,har mdc vist å indusere Th2-polarisering, oppregulere IL-4sekresjon, nedregulere IFN-γ produksjon og indusere eosinofil betennelse (9,10). Men studier som undersøker effekten AV knockdown AV CD80 og CD86 I DCs pådifferensiering av og cytokinutskillelse Av t-hjelperceller inmurinmodeller av astma mangler.

i denne studien ble co-stimulerende t-cellaktiveringssignaler blokkert av suppresjon AV CD80 og Cd86molekyluttrykk på DCs ved bruk av små interfererende RNA (siRNA), og effektene AV CD80 og CD86 knockdown på uttrykksnivåene til th1 / Th2 typiske cytokiner IFN-γ OG IL-4 ble evaluert. Dermed var POTENSIALET FOR CD80 OG CD86 som mål for anvendelse av rna-interferens (RNAi) i terapeutisk målretting av astma undersøkt.

Materialer og metoder

Dyr

totalt 20 friske spesifikke patogenfrie graderbalb / c mus (6-8 uker; gjennomsnittlig vekt, 18±2 g) ble kjøpt Frasentrum Av Forsøksdyr Av Sun Yat-Sen University (Guangzhou, Kina). Eksperimenter ble utført i henhold tilprotokoller godkjent Av Animal Studies Committee Of Sun Yat-SenUniversity.

Astmamodeller

totalt 20 mus ble randomisert til to grupper: i) den astmatiske gruppen og ii) den normale kontrollen group.In den astmatiske gruppen, hver mus ble sensibilisert for ovalbumin(OVA; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) intraperitoneally på dager1, 14 og 21 med 100 µ EGG som ble emulgert i 20 mg alun (Guangzhou Chemical Reagent Co., Guangzhou, Kina). Deretter ble musene utsatt for en aerosol-utfordring på 5% ROGN i 30 minutter/dag i lufttette beholdere (med dimensjoner på 50×50×50 cm) pådager 28-34. I den normale kontrollgruppen ble mus sensibilisert og utfordret som ovenfor med en tilsvarende mengde saltoppløsning i stedet for EGGPROTEINOPPLØSNINGEN. Ved 24 h etter sistutfordring ble mus ofret av en godkjent cervikal dislokasjonprosedyre utført av dyktig og fullt utdannet personell. Lungene ble fjernet og deretter festet i 10% etanol i 24 timer. Prøver ble dehydrert, innebygd i paraffin og farget medhematoksylin og eosin som tidligere beskrevet (11). Patologiske endringer i bronkial oglungevev ble vurdert under Et Nikon Eclipse Ti lightmicroscope (Nikon Corporation, Tokyo, Japan).

Separasjon av benmarg-derivedDCs

alle mus ble ofret ved cervikal dislokasjon 24h etter den siste utfordringen. Benmarg ble spylt fra thefemurs og tibiae MED rpmi-1640 kultur medium (Gibco; ThermoFisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA). Ettersentrifugering ved 250 × g i 5 min ble cellene behandlet med rødblodcelle (RBC) lysisbuffer(CWBio Co., Ltd., Beijing,Kina), vasket med fosfatbufret saltvann (PBS), sentrifugert til 250 × gfor 5 min og dyrket I RPMI-1640 supplert med rekombinantmus granulocyttmakrofag kolonistimulerende faktor (rmGM-CSF;Peprotech, Inc., Rocky Hill, NJ, USA; 10 ng / ml), og rmIL-4(Peprotech; 10 ng/ml) ble brukt i sin tur. Etter 6 dager med kultur ble det tilsatt 1µ/ml lipopolysakkarid (Lps; Sigma-Aldrich), og deretter ble ikke-adherente mdcer høstet på dag 7. DCs ble beiset til 4°Cfor 30 min med fluoresceinisotiocyanat (FITC)-konjugerthamster anti-CD11C (5 µ/ml; 11-0114), phycoerythrin (PE)-konjugert hamster anti-CD80 (5 µ/ml; 12-0801), FITC-konjugatrat anti-CD86 (5 µ/ml; 11-0862) OG PE-konjugert rotte anti-majorhistokompatibilitet kompleks (mhc) ii (5 Μ/ml; 12-5322; ALLEBIOSCIENCE, inc., San Diego, CA, USA) monoklonale antistoffer, ogble deretter analysert ved flowcytometri (BD FACSVerse; Bdbiosciences, Franklin Lakes, NJ, USA) for å bestemme thepositive uttrykk rate av merket antigen uttrykk.

siRNA og transfeksjon

de spesifikke siRNA-sekvensene (Tabell I) rettet MOT CD80 OG CD86 ble utformet og valgt i henhold Til metodene Til Gu et al (12). Alle siRNA ble kjøpt frashanghai GenePharma Co., Ltd. (Shanghai, Kina). Transfectionstep ble utført i henhold til produsentens protokoll forLipofectamine 2000 (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.).Kort sagt ble DCs dyrket i en 24-brønns vevskulturplate ved en tetthet på 1×105 celler/brønn dagen før transfeksjonen. Tilforbered lipid-siRNA komplekser, 3 µ Lipofektamin 2000 varinkubert i 50 µ (Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc .) ved romtemperatur i 5 min, og 12 hryvnas av den angitte siRNA varcurrently kombinert med 50 µ Opti-MEM. Fortynnetlipofektamin 2000 og siRNA ble deretter blandet og inkubert i ytterligere 20 minutter ved romtemperatur for kompleks dannelse.Deretter ble komplekset inkubert med DCs i en 24-brønnplate ved 37°C i en 5% fuktet CO2 i luftatmosfærefor 6 timer. når cotransfection ble utført, ble tilsvarende mengder avcd80 siRNA:Lipofectamine 2000 og CD86 siRNA: Lipofectamine 2000complexes tilsatt til hver brønn. FAM-scrambled-siRNA ble brukt somden negative kontrollen for å bestemme transfeksjoneffektiviteten. Tre grupper av transfiserte DCs ble etablert: Inden ikke-siRNA-gruppen ble Bare Lipofektamin 2000 tilsatt, uten at anysiRNA ble tilsatt Til DCs. I siRNA-gruppen ble mDCs transfisert AV CD80-og CD86-spesifikke siRNA. I negativesiRNA-gruppen ble mDCs transfisert av ikke-spesifikk ikke-målrettingfam-siRNA, som ikke har noen homologi med de målrettede Rna.Eksperimenter ble utført i tre eksemplarer for hver prøve.Transfeksjonseffektivitet ble bestemt ved hjelp av fluorescensmikroskopi (Nikon Eclipse Ti, Nikon Corporation) og oppdaget byflow cytometri.

Omvendt transkripsjon-kvantitativpolymerase kjedereaksjon (RT-qPCR)

FOR å evaluere CD80 og CD86 mRNA uttrykksnivåer etter transfeksjon BLE RT-qPCR utført. Primer sekvenser (Tabell II) ble utformet i henhold Til GenBank og syntetisert Av DaAn Gene Co., Ltd. Av Sun Yat-SenUniversity (Guangzhou, Kina). Ved 24 timer etter transfeksjon ble totalRNA på 1×106 DCs ekstrahert ved Bruk Av TRIzol-reagens (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.) og omvendt transkribert og forsterket Ved Hjelp Av QuantiTect SYBR Green RT-PCR kit (Qiagen GmbH, Hilden, Tyskland) I En Roche LightCycler 480 (Roche Diagnostics, Basel, Sveits). Forsterkningene ble utført i henhold til produsentens protokoll FOR Kvantiteten SYBR Green RT-PCRkit (Takala, Japan). Forsterkningsforholdene var 40 sykluser av93°C i 3 min, 93°C i 30 sek, 55°C i 45 sek og 72°C i 45 sek. hver prøve ble administrert til hver av tre brønner. Relativegene expression levels were calculated using the quantificationcycle (Cq) method with normalization to glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase (GAPDH) as the reference gene using 2−∆∆Cq(13).

Strømningscytometri

for å oppdage DE positive uttrykksratene FOR CD80 ogcd86 på Dc-ene etter transfeksjon, ble strømningscytometri utført PÅ MHC II / CD11c-porten FOR CD80 og CD86. Seks timeretter transfeksjon ble DCs vasket to ganger med PBS og inkubert med fluorescerende merket antistoff ved 4°C i 30 min.Deretter ble cellene vasket igjen MED PBS og festet med10 g / l paraformaldehyd. Følgende anti-mus monoklonalantistoffer ble brukt: PE-ANTI-MHC II, FITC-Anti-CD11c, PE-ANTI-CD80 og FITC-ANTI-CD86, som nevnt ovenfor. Alle flowcytometriske analyser ble utført ved Bruk Av IgG-isotypiske kontroller.

t-celleseparasjon

Milt ble fjernet etter at musene hadde blitt nøytanisert ved cervikal dislokasjon. T-celler ble separert ved bruk avmus Lymfocytt Separasjonsmedium i henhold til produsentens protocol (Dakewe Biotech Co., Ltd., Kina). Celletettheten ble justert til 1×109 / l før videre behandling.

Blandet lymfocyttreaksjon (MLR)

De astmatiske murine benmarg-avledede DCs(1×104/brønn) og friske T-celler (1×105/brønn) var ko-kultiverte i 96-brønnplater i forholdet 1:10. Samkultursystemene ble delt inn i tre grupper: i) ikke-siRNA-gruppen, ii) siRNA-gruppen, andiii) den negative siRNA-gruppen, Med DCs fra de tilsvarende gruppene som beskrevet ovenfor. DERETTER ble OVA tilsatt til hver brønn til afinal konsentrasjon på 10 mg / l i et totalt volum på 200 µ. Cellene ble inkubert ved 37°C i en 5% fuktet CO2 inair atmosfære i 72 timer.

Enzymbundne immunosorbentanalyser (ELISAs)

etter 3 dager med ko-kultur ble supernatanten innsamlet. Ifn-γ og IL-4 nivåer ble analysert ved BRUK av elisa-settspesifikke FOR IFN-γ OG IL-4 (Dakewe Biotech Co., Ltd.) i henhold til produsentens instruksjoner. Absorbansverdier ble lest ved 450 nm ved Hjelp Av En Multiskan MK3 (Thermo Fisher Scientific, Inc.).

Statistisk analyse

Statistiske analyser ble utført Med SPSSsoftware, versjon 13.0 (SPSS, Inc., Chicago, IL, USA). Data er presentert som gjennomsnittlig ± standardavvik (SD). Undersøkelser varutført i tre eksemplarer for hver mus. Statistiske sammenligninger mellom grupper ble utført ved hjelp av enveisanalyse av varians,og sammenligninger i en gruppe ble utført Ved Hjelp Av Student ‘ st-test. Forskjeller mellom grupper ble vurdert statistiskbetydelig når P <0,05.

Resultater

Astmatisk modell

de 20 sunne SPF-grade BALB/c-musene ble tildelt astmatiske og normale kontrollgrupper, med 10 mus i hver. Allmice ble evaluert i den endelige analysen uten eksperimentelldyr tap. Ifølge lungevevspatologien, lungeseksjonerfra DE OVA-immuniserte musene viste klar luftveisbetennelse medperibronchiolære og perivaskulære infiltrater. Disse infiltratene bestod hovedsakelig av eosinofiler og lymfocytter, ogseksjoner viste bronkial mucosa og glatt muskel fortykkelse, økt slimutskillelse, epitelceller i luftveiene, luftveisstenose og inflammatoriske celler spredt i lunginterstitium. Ingen signifikante patologiske endringer ble observert ilungeseksjoner fra den normale kontrollgruppen. Representanthistopatologiske data er vist I Fig.1.

Celleoverflatemolekyluttrykk bymDCs

uttrykksnivåene For CD11c, CD80 og CD86 på themDC-overflater ble detektert ved fluorescensaktivert cellesortering (FACS). mDCs fra den astmatiske gruppen uttrykte CD11c på et nivå som kan sammenlignes med det i den normale kontrollgruppen; ingen signifikant forskjell ble funnet mellom de to gruppene(P > 0,05). Men i sammenligning med den normale kontrollgruppen, den astmatiske gruppenviste betydelig høyere CD80 og CD86 uttrykksnivåer (P<0,05; Fig. 2).

Transfeksjon av mDCs

DE CD80-og CD86-spesifikke siRNA-konstruksjonene ble vellykket overført til mDCs. De transfiserte mdcene varobservert under et fluorescensmikroskop 6 h etter transfeksjon.Transfeksjonseffektiviteten til siRNA oppdaget AV FACS var ~75% (Fig. 3).

mRNA og protein ekspresjon Av Cd80 Og CD86 av mDCs etter transfeksjon

mrna og protein ekspresjon nivåer AV CD80 andCD86 i de transfiserte mDCs ble detektert VED RT-qPCR og Facsanalyse ved henholdsvis 24 og 72 h etter transfeksjon. Den CD80and CD86 mRNA uttrykk nivåer oppdaget ved RT-qPCR angitt thatCD80 mRNA uttrykk nivåer i ikke-siRNA, siRNA og negativesiRNA grupper var 2.09±0.46, 0.60±0.17, og 2.04±0.93,henholdsvis, og CD86 mRNA uttrykk nivåer var 3.58±0.20,0.91±0.48, og 2.83±0.83, henholdsvis. Data levert av FACSindicated at CD80 protein positive uttrykk priser i thenon-siRNA, siRNA og negative siRNA grupper var 82.45±15.80,30.79±7.07 og 81.83±10.07%, henholdsvis, og CD86 proteinpositive uttrykk priser ble 89.45±10.22, 27.29±6.99, and87.66±11.74%, henholdsvis. MRNA-uttrykksnivået og proteinpositive uttrykksrater viste sammenlignbare resultater. Det var ingen signifikant betydning mellom ikke-siRNA-gruppen og den negative siRNA-gruppen(P >0,05). CD80 og CD86 uttrykk på themRNA og protein nivåer i siRNA gruppen redusert significantlycompared med at i ikke-siRNA og negative siRNA grupper (P <0,05; Figs. 4 og 5). Dette viser at siRNA-targetedinterference kan betydelig undertrykke CD80 og CD86 mRNA ogproteinuttrykk nivåer.

ifn-γ OG IL-4 sekresjon fra T-cellersco-kultivert med mDCs

ETTER 72 timer med ko-kultur, IFN-γ og IL-4 nivåer i supernatanten i mDC – og T-cellekultursystemet ble oppdaget AV ELISA. IFN-γ uttrykket ble signifikant økt i siRNA-gruppen (132.73±25.04 pg/ml), sammenlignet med thenon-siRNA og negative siRNA grupper (72.56±26.30 og 80.21±24.42 pg/ml, henholdsvis; P<0.05), Mens ingen signifikante forskjellerble oppdaget mellom de ikke-siRNA og negative siRNA gruppene(P>0,05). IL-4-uttrykksnivåene ble signifikant redusert i siRNA-gruppen (93.04±23.13 pg/ml), sammenlignet med de ikke-sirna og negative siRNA-gruppene (henholdsvis 150.69±29.50 og 163.19±25.36 pg/ml; P<0.05), Mens ingen signifikante forskjeller ble oppdaget mellom de ikke-siRNA-og negative siRNA-gruppene(P>0,05; fig. 6).

Diskusjon

Bronkial astma er en kronisk inflammatorisk luftveissykdom som involverer en rekke inflammatoriske celler, inkludert mastceller, eosinofiler, lymfocytter og andre cellekomponenter (14-17).Th1 / Th2 ubalanse er en nøkkelfaktor som bidrar til astmaens alvorlighetsgrad(18). Apcer, inkludert DCs, makrofager og B-celler (19), spiller en avgjørende rolle i stimuleringen Av T-celler(3). BLANT DEM ER DC den mektigsteapc, som bidrar til primære og sekundære immunresponser,inkludert allergisk immunitet. Eldre DCs (mDCs) med høye nivåer av uttrykk FOR DE co-stimulerende molekylene CD80 og CD86 kan aktivere T-celler, mens umodne dendrittiske celler (iDCs) med lavt uttrykksnivå FOR CD80 og CD86 undertrykker t-celleresponsen og induserer immuntoleranse (20,21). Dcsinpasienter med astma har vist seg å være hyperaktive(22).CD80 OG CD86 ER to typer protein som eruttrykt PÅ APC-overflaten, og som fungerer sammen for å gi øko-stimulerende signaler som er nødvendige for t-celleaktivering ogoverlevelse. Tidligere studier har vist at uttrykksnivåene til DE co-stimulerende molekylene CD80 og CD86 på mDC-overflaten er nært forbundet Med Th2-cellereaksjon og luftveisbetennelse (23,24). Hos astmapasienter kan mDCs som uttrykker CD80 og CD86, stimulere NAÏ CD4 + helper T-celle aktivering for å differensiere mot Th2-celler, noe Som resulterer i En th1/Th2 ubalanse. Som følge av dette forårsaker utilstrekkeligsekresjon Av Th1-cytokiner SOM IFN-γ, sammen med økt avsekresjon Av Th2-cytokiner SOM IL-4 og IL-5, eosinofil betennelse og allergisk luftveisbetennelse(10,24,25). Tosignaler kreves For å fremme Th2-celleaktivering (26-28). Det første signalet er dannelsen avantigen-MHC-komplekser på mDC-overflaten som binder spesifikt Med T-cellereseptor-CD3-reseptorkomplekset på t-celleoverflater,og det andre signalet er ko-stimulerende molekyluttrykk og funksjonell aktivering på mDC-overflatene som spesifikt binder toreceptorer på naï T-celler; de to signalene danner en ko-stimulatorvei (29). Det har også blitt antydet at det er et tredje signal (30), da visse cellulære molekyler produsert Av DCs, som tymisk stromal lymfopoietin (TSLP), påvirker retningen Av th-celledifferensiering. Men blant allenevnte signaler, cd80 / CD86-CD28 co-stimulatory pathways den mest klassiske og viktige. Tidligere forskning har vist at CD80 / CD86-CD28 co-stimulatory pathway kan være et effektivt mål for astmabehandling ved å demonstrere at blokkering av cd80 / CD86 co-stimulatory pathway ved monoklonale antistoff nærmer segkan hemme betennelse hos astmatiske mus (25). I tillegg kan undertrykkelse AV CD80 / CD86co-stimulerende vei ved hjelp av antisense oligonukleotider undertrykke luftveis hyperaktivitet (31).

RNAi Er et gen-silencing fenomen hvorbyendogen-eller eksogen-spesifikk dobbeltstrenget Rna utløser nedbryting av homolog mRNA og induserer tap av tilsvarendefunksjonelle fenotyper. Siden teknikken først ble oppdaget I 1998 Av Fire et al (32), har teknikken gjennomgått videreutvikling for å oppnå en høy grad av spesifisitet og effektivitet. Den terapeutiske anvendelsen Av RNAitechnology er et tema som har tiltrukket seg høye nivåer av interesse for grunnleggende medisinsk og klinisk forskning de siste årene.Rnais evne til å hemme virulent genuttrykk har værtmye brukt til å behandle en rekke sykdommer (33-35).Også en rekke studier har rapportert At rnai kan brukes inDCs til å diagnostisere og behandle bronkial astma (36-39).Darcan-Nicolaisen et al (40)oppdaget at de to store tegn på allergisk astma i theOVA-indusert astma musemodell, som er luftveisbetennelse andhyperactivity, ble signifikant forbedret ved signaltransduser og aktivator av transkripsjon 6 (STAT6) silencing i airwayepithelial celler ved bruk av administrasjon av siRNA nesedråper.Moriwaki et al (41)viste at siRNA-mediert suppressor av cytokin signalering 3 (SOCS3) gen silencing kunne undertrykke luftveis reaktivitet andeosinofil infiltrasjon som ble indusert av allergifremkallende stimulering hos astmatiske mus. Zheng et al (42) fant at anvendelsen av siRNA var i stand til å hemme tyrosinproteinkinase (TPK) genuttrykk i DCs av astmatiske mus, undertrykker funksjonell evne til dcs som antigen-presenterende celler, og derved hemmer T-cellaktivering og differensiering. Imidlertid mangler studier omeffekter av siRNA-mediert CD80 og CD86 knockdown I DCs På T-celledifferentiering hos astmatiske mus. I presentstudy, CD80 og CD86 mRNA og protein uttrykk i murine bonemarrow-avledet DCs ble vellykket redusert MED CD80-andCD86-målretting siRNA, som bekreftet effektiviteten Av RNAi.

i denne studien ble det brukt en astmatisk musemodell som ble etablert etter tidligere rapporterte metoder (43). Resultatene indikerte at mdc-ene fra astmagruppen viste økte Cd80-og CD86-uttrykksnivåer, noe som innebærer AT CD80/Cd86kapasiteten kan økes hos astmatiske pasienter. Followingtransfection av mDCs MED CD80-OG CD86-målrettet siRNA, themRNA uttrykksnivåer og protein positive uttrykksrater ofCD80 OG CD86 ble betydelig redusert, bekrefter theinhibitory effekt at siRNA tilnærming hadde på co-stimulatorymolekyler CD80 OG CD86 på transkripsjons og translationallevels. I supernatanten fra ko-kulturen til mDCs og T-celler induserte RNAi en økning I IFN-γ uttrykk og en reduksjon av ofIL – 4 nivåer, noe som indikerer at reduksjon av ekspresjonen av theco-stimulerende molekyler CD80 og CD86 i mDCs svekket theCD80 / CD86-CD28 ko-stimulerende vei hos astmatiske mus. RNAi også påvirket uttrykket Av th1 / Th2 cytokiner, noe som indikerer at den opprinnelige th1 / Th2 ubalansen ble endret og følgelig immuntoleranse ble indusert. Disse funnene indikerer AT CD80 Og Cd86 Kan være potensielle mål for RNAi-applikasjon i astmabehandling, og gi en ny avenue for genterapi av astma.

Anerkjennelser

denne studien ble støttet Av Et Åpent Prosjekt Grantsfra State Key Laboratory Of Respiratory Disease (Guangzhou, Kina) (stipend nr. 2007da80154f1107).

	Locksley RM: Astma og allergiskbetennelse. Celle. 140:777–783. 2010. Vis Artikkel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Holgate ST: Medfødte og adaptive immunrespons ved astma. Nat Med. 18:673–683. 2012. View Article: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Lerké M, Robinson DS og Kay AB: rollenav T-lymfocytter i patogenesen av astma. J Allergi ClinImmunol. 111:450–464. 2003. Vis Artikkel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Lambrecht BN Og Hammad H: rollen tildendrittiske og epitelceller som hovedregulatorer av allergiskluftbetennelse. Lancet. 376:835–843. 2010. Vis Artikkel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Holt pg OG Upham JW: rollen tildendritiske celler i astma. Curr Opin Allergi Clin Immunol. 4:39–44.2004. Vis Artikkel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Lim TS, Goh JK, Mortellaro A, Lim CT,H@mmerling GJ OG Ricciardi-Castagnoli P: CD80 OG Cd86differensielt regulere mekaniske interaksjoner Av t-celler medantigen-presentere dendritisk celler og B-CELLER. PLoS One.7:. Vis Artikkel : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Wong CK, Lun SW, Ko FW, Ip WK, Hui DS andLam CW: Økt ekspresjon av plasma-og celleoverflateøkostimulerende molekyler CTLA-4, CD28 og CD86 hos voksne pasienter med allergisk astma. Clin Exp Immunol. 141:122–129. 2005.Se Artikkel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Shi HZ, Xie ZF, Deng JM, Chen YQ Og XiaoCQ: Oppløselig CD86-protein i serumprøver av pasienter med astma.Thorax. 59:870–875. 2004. Vis Artikkel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Van Rijt ls Og Lambrecht BN: Dendritiskceller i astma: en funksjon utover sensibilisering. Clin Exp Allergi.35:1125–34. 2005. Vis Artikkel : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Av Rijt LS, Vos N, Willart M, Kleinjan A,Coyle AJ, Hoogsteden HC Og Lambrecht bn: Viktig rolle avdendritisk celle CD80/CD86 kostimulering I Induksjon, men ikkereaktivering, av th2 effektrespons i en musemodell av astma.J Allergi Clin Immunol. 114:166–173. 2004. Vis Artikkel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Wu SG, Wang GL, Li LY Og Ji J: Effekter avmikrorna-21 på interleukin 12 / signaltransduser og aktivatorav transkripsjon 4 signalvei i astmatiske mus. Cent Eur JImmunol. 39:40–45. 2014. Vis Artikkel : Google Scholar: PubMed/NCBI
	Gu X, Xiang J, Yao Y Og Chen Z: Effekter AV rna-interferens på CD80-og CD86-uttrykk i bonemarrow-avledede murine dendritiske celler. Scand J Immunol. 64:588–594.2006. Vis Artikkel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Livak KJ OG Schmittgen TD: Analyse av relative genuttrykk data ved hjelp av sanntids kvantitativ PCR ogden 2- ∆ ∆ ct Metoden. Metoder. 25:402–408. 2001. Vis Artikkel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Fanta CH: Astma. N Engl J Med.360:1002–1014. 2009. Vis Artikkel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Lambrecht BN Og Hammad H: lunge dendritiskceller i respiratorisk virusinfeksjon og astma: fra beskyttelse tilimmunopatologi. Annu Rev Immunol. 30:243–270. 2012. View Article : Google Scholar: PubMed/NCBI
	Wenzel SE: Astma fenotyper: Evolusjon fra kliniske til molekylære tilnærminger. Nat Med.18:716–725. 2012. ViewArticle: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Hansel TT, Johnston sl og Openshaw Pj:Mikrober og mucosal immunrespons ved astma. Lancet.381:861–873. 2013. Vis Artikkel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Compalati E, Braido F Og Canonica gw: Anupdate på allergen immunterapi og astma. Currr Opin Pulm Med.20:109–117. 2014. Vis Artikkel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Goyvaerts C, Dingemans J, De Groeve K,Heirman C, Van Gulck E, Vanham G, De Baetselier P, Thielemans K,Raes G Og Breckpot K: Målretting av humant antigenpresentasjon cellsubsets. J Virol. 87:11304–11308. 2013. Vis Artikkel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Reise Sousa C: Dendritiske celler i en modningalder. Nat Rev Immunol. 6:476–483. 2006. ViewArticle: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Gill MA: rollen til dendritiske celler iastma. J Allergi Clin Immunol. 129:889–901. 2012. Vis Artikkel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Shi JH, LI YG OG LI TS: rollene tildendritiske celler i antigenpresentasjon og patogenesen avastma. Zhonghua Jie Han Han Hu Xi Za Zhi. 28:22–27. 2005.(Ink kinesisk). PubMed / NCBI
	Wong CK, Lun SW, Ko FW, Ip WK, Hui DS oglam CW: Økt ekspresjon av plasma-og celleoverflateøko-stimulerende molekyler CTLA-4, CD28 og CD86 hos voksne pasientermed allergisk astma. Clin Exp Immunol. 141:122–129. 2005.View Article: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Bellou A og Finn PW: Kostimulering: Kritiske veier i immunologisk regulering av astma. Currallergi Astma Rep. 5: 149-154. 2005. Se Artikkel : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Chen YQ OG SHI HZ: CD28/CTLA-4-CD80 / Cd86og ICOS-B7RP – 1 kostimulerende vei i bronkial astma. Allergi.61:15–26. 2006. View Article : Google Scholar:PubMed/NCBI
	Bieber T, Novak N, Herrmann n Og Koch S: rolle av dendritiske celler i atopisk dermatitt: en oppdatering. Clin Revallergi Immunol. 41:254–258. 2011. Vis Artikkel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Hespel C Og Moser M: rolle av inflammatoriskdendritiske celler i medfødt og adaptiv immunitet. Eur J Immunol.42:2535–2543. 2012. Vis Artikkel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Novak N: en oppdatering på rollen til humandendritiske celler hos pasienter med atopisk dermatitt. J Allergi ClinImmunol. 129:879–886. 2012. Vis Artikkel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Lombardi V, Singh AK Og Akbari O: Rollen av costimulatory molekyler i allergisk sykdom og astma. IntArch Allergi Immunol. 151:179–189. 2010. Vis Artikkel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Zhang Y, Zhou X Og Zhou B: DC-derivedTSLP fremmer Th2 polarisering i LPS-primet allergisk luftveisbetennelse. Eur J Immunol. 42:1735–1743. 2012. Vis Artikkel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Crosby JR, Guha M, Tung D, Miller DA,Bender B, Condon TP, York-DeFalco C, Geary RS, Monia BP, Karras Jgog Gregory SA: Inhalert CD86 antisense oligonukleotid suppressespulmonal betennelse OG LUFTVEIS HYPER-respons i allergiskmus. J Pharmacol Exp Ther. 321:938–946. 2007. Vis Artikkel : Google Scholar: PubMed/NCBI
	Brann A, Xu S, Montgomery MK, Kostas SA,Driver SE OG Mello CC: Potent og spesifikk genetisk forstyrrelse avdobbeltrådet RNA I Caenorhabditis elegans. Natur.391:806–811. 1998. ViewArticle: Google Scholar : PubMed/NCBI		Ghafouri-Fard S: siRNA og kreftimmunoterapi. Immunterapi. 4:907–917. 2012. View Article : Google Scholar: PubMed/NCBI		Gavrilov K og Saltzman WM: TherapeuticsiRNA: Prinsipper, utfordringer og strategier. Yale J Biol Med.85:187–200. 2012.PubMed / NCBI
	Yan WJ, Xu SJ, Xie MM OG Wu BL: Effekterav eksogent syklisk dimerisk guanosinemonofosfat på genetuttrykk Av Streptokokker mutaner. Zhongguo Zu Zhi GongCheng Yan Jiu. 16:1451–1454. 2012.(På Kinesisk).
	Lee CC, Huang HY og Chiang BL:Lentiviralmediert interleukin-4 Og interleukin-13 RNAinterference reduserer luftveisbetennelse og hyperresponsivitet.Hum Gene Ther. 22:577–686. 2011. Se Artikkel : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Li Y, Sun M, Cheng H, Li S, Liu L,Qiao H, Hua S Og Lu J: Stille IL-23 uttrykk ved en liten hårnål Rnabeskytter mot astma hos mus. Exp Mol Med. 43:197–204. 2011.View Article : Google Scholar: PubMed/NCBI		Woska JJ OG Gillespie ME: Liten-forstyrrende RNA-mediert identifikasjon og regulering av theternær SNARE kompleks medierende RBL-2H3 mastcelledegranulering.Scand J Immunol. 73:8–17. 2011. View Article : Google Scholar:PubMed/NCBI		Lu XX, McCoy KS, Xu JL, Hu WK og Chen HB: Liten forstyrrende RNA rettet Mot T-celle ig mucin-3 minsker allergisk luftveisbetennelse og hyperresponsivitet. Inflammasjon.36:582–591. 2013. Vis Artikkel : Google Scholar : PubMed/NCBI		Darcan-Nicolaisen Y, Meinicke H, Fels G,Hegend O, Hadberland A, Kühl A, Loddenkemper C, Witzenrath M, KubeS, Henke W Og Hamelmann E: Liten forstyrrende RNA mottranskripsjonsfaktor STAT6 hemmer allergisk luftveisbetennelseog hyperreaktivitet hos mus. J Immunol. 182:7501–7508. 2009.Vis Artikkel : Google Scholar : PubMed/NCBI		Moriwaki A, Inoue H, Nakano T, MatsunagaY, Matsuno Y, Matsumoto T, Fukuyama S, Kan-O K, Matsumoto K,Tsuda-Eguchi M, et Al: T-Cellebehandling Med Liten forstyrrende rnafor suppressor av cytokin signalering 3 modulerer allergiske luftveisresponser i en murin modell av astma. Er J Respir Celle Mol Biol.44:448–455. 2011. Vis Artikkel : Google Scholar : PubMed/NCBI		Zheng YH, Lu JJ, Guo ZL, Ren T Og LiangYJ: Små forstyrrende Rnaer som er spesifikke for milttyrosinkinaseinhibit modning av dendritiske celler av astmatiske mus in vitro.Zhongguo Hu Xi Yu Wei Zhong Jian Hu Za Zhi. 8:487–491. 2009.(Ink kinesisk).
	Li JG, Zhuansun YX, Ran PX, Zhang W, MoXN, Wu H Og Li YQ: Effekter av benmargs mesenkymale stamcellerpå CD4 + CD25 + regulatoriske t-celler og luftveisbetennelse hos astmatiske mus. Zhongguo Zu Zhi Gong Cheng Yan Jiu.12:9302–9305. 2008.(På Kinesisk).