Full paperstruktur og funksjon av zona pellucida: Identifikasjon og karakterisering av proteinene i museocyten's zona pellucida☆

zona pellucida er en acellulær kappe som omgir plasmamembranen av fullvoksne celler.mammalian oocytter og som utfører en rekke viktige Funksjoner under oogenese, befruktning og preimplantasjonsutvikling. I denne undersøkelsen har proteinene i museokocytens zona pellucida blitt identifisert og karakterisert ved bruk av zonae pellucidae isolert individuelt fra fullvoksne oocytter med munnopererte mikropipeter. Ulike morfologiske og biokjemiske kriterier ble anvendt for å vurdere renheten av den isolerte zonae pellucidae og, i de fleste tilfeller, de ble funnet å være praktisk talt fri for forurensning av andre oocyte proteiner. Det ble bestemt at hver zona pellucida inneholder 4.8 ng protein, som representerer 80% eller mer av tørrvekten til zona pellucida og ca. 17% av oocytens totale protein. Elektroforetiske analyser av så få som fem isolerte zonae pellucidae behandlet med diazotisert jodsulfanilsyre viste tilstedeværelsen av bare tre radiomerkede proteiner, betegnet ZP1, ZP2 og ZP3. De samme tre proteiner ble identifisert Ved Coomassie blå flekker når et stort antall isolerte zonae pellucidae (ca 750) ble utsatt FOR sds-polyakrylamid gel elektroforese. Disse tre proteinene migrerer som brede bånd PÅ sds-polyakrylamidgeler, i samsvar med at de er glykoproteiner, med tilsynelatende molekylvekt på 200,000 (ZP1), 120,000 (ZP2) og 83,000 (ZP3). De samme proteinene ble radiomerket når intakte oocytter ble behandlet med diazotisert jodsulfanilsyre, et reagens som ikke trenger inn i oocytens plasmamembran, eller når isolerte zonae pellucidae ble behandlet MED 3H-merket 1-dimetylaminonaftalen-5-sulfonylklorid. Resultater av aminosyreanalyse og høyoppløselig todimensjonal elektroforese av de enkelte proteiner antyder at hvert protein representerer en unik polypeptidkjede. Proteinene ZP1, ZP2 og ZP3 representerer henholdsvis 36, 47 og 17% av det totale proteinet i zona pellucida. I nærvær av reduksjonsmidler som forårsaker oppløsning av zona pellucida, blir ZP1 omdannet TIL en art som migrerer med en tilsynelatende molekylvekt på 130 000, noe som tyder på at DEN eksisterer som en oligomer, stabilisert av disulfidbindinger, i uredusert tilstand. Resultatene av disse forsøkene diskuteres med hensyn til egenskapene til zona pellucida før og etter befruktning og sammenlignes med resultater oppnådd ved bruk av vitellin-konvolutter av egg fra ikke-pattedyrarter.

Legg igjen en kommentar

Din e-postadresse vil ikke bli publisert.