Oversikt: med denne metoden skal vi lage en ren og forurensningsfri spore fylt sprøyte. Sprøyten fylles med oppvarmet og sterilisert vann og får avkjøles. Sporene vil da bli overført fra sporetrykk til sprøyteoppløsningen ved hjelp av et renset og sanitisert skuddglass. Ved fullforing av Denne Tek vil du ha opprettet en spor solution sproyte klar til bruk i enhver mikroskopi applikasjon.MERK: disse instruksjonene er mest effektive når de utføres i det mest sterile miljøet som er tilgjengelig. Den foretrukne metoden innebærer å følge trinnene nedenfor mens du arbeider i en ren og steril Hanskekasse eller foran en laminær strømningshette. Hvis Du ikke ønsker å bygge En Hanskekasse, eller ikke har en, har følgende trinn blitt utført med suksess ved å jobbe på en grundig rengjort og sanitisert benkeplate. Liberal bruk av spray desinfeksjonsmiddel og fortynnet blekemiddel er anbefalt for rengjøring og desinfisering av arbeidsområdet.
Nødvendige Materialer:
Tomme sterile sprøyter
To quart (eller større) kokekanne
en flaske 91% isopropylalkohol
Flere papirhåndklær
en lettere eller alkohol flamme
et skudd glass
Sterile spore print
Prosedyre En: Å Lage en steril sprøyte
1. Fyll kokekaret halvveis med vann fra springen eller destillert vann (bruk destillert vann hvis kranvannet inneholder høyere nivåer av mineraler og kjemikalier).
2. Kok vannet i potten på høy i minst ti minutter, dette bør være tilstrekkelig til å sterilisere og renser vannet fra alle bakterier, virus og muggsporer.
3. Ta den tomme sprøyten og fyll den med kokende vann. La det sitte i to minutter med varmt vann inni. (Hvis sprøyten var sterilpakket, hopp over trinn 4 og 5).
4. Rengjør varmtvannet fra sprøyten i en vask, ikke tilbake i gryten.
5. Gjenta trinn 3 og 4 to ganger til. Ved andre gang forlater varmtvannet i sprøyten.
6. Plasser sprøyten på et kjølig trekkfritt sted, helst i en ren pose med glidelås
7. La det avkjøles i flere timer før Du går Videre Til Prosedyre To.
Prosedyre To: Overføring av trykksporer til sprøyte
1. Rengjør først arbeidsområdet. Dette kan innebære å tørke ned alle arbeidsflater med en fortynnet blekemiddel og sprøyte området rikelig med et desinfeksjonsmiddel som Lysol.
2. Plasser følgende materialer i hanskerommet eller på den rensede og sanatiserte arbeidsflaten: skuddglasset, de avkjølte sprøytene, alkoholflasken, et papirhåndkle, utskriften din (fortsatt i zip-lock baggie) og lettere eller alkoholflammen.
3. Vask hendene med antibakteriell såpe før du fortsetter videre.
4. Brett papirhåndkleet opp i ¼ – seksjoner og suge et hjørne av det med alkoholen.
5. Med alkohol fuktet håndkle tørk det indre av shot glass, i hovedsak sterilisere overflaten du skal bruke i overføringen. La skuddglasset lufttørke, det tar bare noen sekunder.
6. Fjern nålebeskyttelsen fra den sterile sprøyten, og flammen steriliserer nålen. Ta deretter alkohol fuktet papirhåndkle og tørk nålen for å ytterligere hjelpe til med steriliseringen. Prøv å unngå å la nålen berøre andre overflater med mindre annet er instruert om å gjøre det.
7.MERK: det er viktig på dette punktet å arbeide så raskt som mulig for å bekjempe sjansene for å forurense mugg og bakterier som faller inn i arbeidsområdet og dermed ødelegge sprøyten.
8. Fjern utskriften fra oppbevaringsposen. Fold den ut for å avsløre sporene. Begynn lett å skrape, ved hjelp av sprøytens nål, en del av utskriften inn i skuddglasset. For en middels stor utskrift er det vanligvis tilstrekkelig å skrape av en del som ikke er større enn 1/5 av den totale utskriften.
9. Du vil ha en liten merkbar samling sporer i skuddglasset. Fjern ikke mer enn halvparten av vannet fra sprøyten inn i skuddglasset, rør lett sporene i løsningen.
10. Sug sporevannoppløsningen i sprøyten. Du må kanskje tømme litt mer vann inn i skuddglasset og suge for å hjelpe til med å fange alle sporene i sprøyten.
11. Når du har sporeoppløsningen tilbake i sprøyten, bør du legge merke til at vannet inne har blitt litt tonet, og du kan se små klynger av sporer som flyter i løsningen. Dette er bra, du har fullført prosessen.
12. Steriliser nålen igjen med det alkohol-fuktede papirhåndkleet, sett på kanylebeskyttelsen og sett sprøyten tilbake i den rene glidelåsposen.
13. La sprøyten sitte i minst 12 timer før bruk i mikroskopiapplikasjon eller inokulering for spiselige varianter. Jo eldre utskriften som brukes, jo mer» dehydrert » blir sporene. For riktig mikroskopi observasjon eller spiring, sporene må få lov til å rehydrere.