Inokuleringrediger
Laboratorieteknikere inokulerer prøven på visse faste agarplater med streakplate-metoden eller i flytende kulturmedium, avhengig av hva formålet med isolasjonen er:
- hvis man bare ønsker å isolere en bestemt gruppe bakterier, som Gruppe A Streptokokker fra en halspinne, kan man bruke et selektivt medium som vil undertrykke veksten av samtidige bakterier som forventes i blandingen (av antibiotika tilstede i agaren), slik at bare streptokokker er «valgt», dvs.synlig skiller seg ut. For å isolere sopp Kan Sabouraud agar brukes. Alternativt, dødelige forhold for streptokokker og gram negative bakterier som høye saltkonsentrasjoner I Mannitol salt agar favoriserer overlevelse av noen stafylokokker som er tilstede i en prøve av tarmbakterier, og fenolrød i agar virker som en ph-indikator som viser om bakteriene er i stand til å gjære mannitol ved å utskille syre i mediet. I andre agarstoffer tilsettes for å utnytte en organismes evne til å produsere et synlig pigment (f. eks. granada medium For Gruppe B Streptokokker) som endrer bakteriekoloniens farge, eller for å oppløse blodagar ved hemolyse slik at de lettere kan oppdages. Noen bakterier som Legionella-arter krever spesielle næringsstoffer eller toksinbinding som i trekull for å vokse, og derfor må medier som Bufret kullgærekstrakt agar brukes.
- Hvis man ønsker å isolere så mange eller alle stammer som mulig, må forskjellige næringsmedier samt berikede medier, som blodagar og sjokoladeagar og anaerobe kulturmedier som tioglykolatbuljong inokuleres. For å oppsummere veksten kan bakterier suspenderes i smeltet agar før den blir solid, og deretter helles i petriskåler, den såkalte pour plate-metoden som brukes i miljømikrobiologi og matmikrobiologi (f. eks.
Inkubasjonredigert
etter at prøven er inokulert i eller på valgmediet, inkuberes de under de riktige atmosfæriske innstillingene, for eksempel aerobe, anaerobe eller mikroaerofile forhold eller med tilsatt karbondioksid (5%), ved forskjellige temperaturinnstillinger, for eksempel 37 °C i en inkubator Eller i kjøleskap for kald anrikning, under passende lys, for eksempel strengt uten lys innpakket i papir eller i en mørk flaske for scotochromogen mykobakterier, og i forskjellige lengder av tid, fordi forskjellige bakterier vokse med en annen hastighet, varierende fra timer (Escherichia coli) til uker(f. eks. mykobakterier).med regelmessige, serielle intervaller inspiserer laboratorieteknikere og mikrobiologer media for tegn på synlig vekst og registrerer det. Inspeksjonen må igjen skje under forhold som favoriserer isolatets overlevelse, det vil si i et anaerobt kammer for anaerobe bakterier, og under forhold som ikke truer personen som ser på platene fra å bli smittet av en spesielt smittsom mikrobe, det vil si under et biologisk sikkerhetskap for Yersinia pestis (pest) eller Bacillus anthracis (miltbrann) for eksempel.
IdentificationEdit
når bakterier har synlig vokst, blir de ofte fortsatt blandet. Identifikasjonen av en mikrobe avhenger av isoleringen av en enkelt koloni, da biokjemisk testing av en mikrobe for å bestemme dens forskjellige fysiologiske egenskaper avhenger av en ren culture.To lag en subkultur, en arbeider igjen i aseptisk teknikk i mikrobiologi, løfter en enkelt koloni av agaroverflaten med en løkke og strekker materialet inn i 4 kvadranter av en agarplate eller over om kolonien var entall og ikke så blandet ut.
Gram farging rå prøven før inkubasjon eller farging fersk vokst koloni materiale bidrar til å avgjøre om en koloni består av jevnt vises bakterier eller er blandet, og farge og form av bakterier tillate en første klassifisering basert på morfologi. I klinisk mikrobiologi brukes mange andre fargeteknikker for bestemte organismer (syrefast bakteriell flekk for mykobakterier). Immunologiske fargingsteknikker, som direkte immunfluorescens, er utviklet for medisinsk viktige patogener som er sakte voksende (Auramin-rhodamin flekk for mykobakterier) eller vanskelig å vokse (Som Legionella pneumophila arter) og hvor testresultatet vil endre standard ledelse og empirisk terapi.Biokjemisk testing av bakterier innebærer et sett med agarer i hetteglass for å skille motile fra ikke-motile bacteria.In 1970 en miniatyrisert versjon ble utviklet, kalt analytical profile index.
vellykket identifikasjon via f. eks. genomsekvensering og genomikk avhenger av rene kulturer.