Rolle i sykdom
Avvikende regulering eller genetiske defekter AV ECM komponenter resulterer ofte i en patogen tilstand.
Genetiske sykdommer: Flere sykdommer har vist seg å være forårsaket av mutasjoner I ECM-gener, inkludert makuladegenerativ sykdom (Fibulin 3, ref. 6), slitasjegikt (Asporin, ref. 7) og medfødt muskeldystrofi (Lamininer, ref. 8).
Kreft Og Metastase: det er mange eksempler som viser at endret uttrykk for ET GITT ECM-protein er korrelert med kreft (9). Det er også godt etablert at nedbrytning av ECM, via handlinger av matriksmetalloproteinaser, er en forutsetning for metastatisk invasjon av kreftceller (10).
Aterosklerose: denne sykdommen har vært knyttet til en opphopning av kollagenplakk (11).feltet regenerativ medisin og vevsteknikk benytter ECM-komponenter for å forsøke å generere en forutsigbar dannelse av vev og organer fra en gitt celletype (12,13).
Analyser Som brukes til å studere ECM
det er en overvekt av kommersielt TILGJENGELIGE ECM reagenser og celle vedlegg/invasjon analyser. Den mest kjente AV ECM reagenser Er MatrigelTM FRA BD som ER EN ECM ekstrakt Fra Engelbreth-Holm-Swarm mus svulst. MatrigelTM består av laminin (56%), kollagen TYPE IV (31%) OG enactin (8%), og flere vekstfaktorer, INKLUDERT EGF (0,7 ng/ml), PDGF (12 ng/ml), IGF-1 (16NG/ml) OG TGF-a (2,3 ng/ml) (14). Lignende produkter inkluderer ECMatrixTM (Millipore) OG ECM gel (Sigma). De fleste kommersielt tilgjengelige invasjonsanalyser benytter Et Boyden-kammer som system (15).Cytoskeleton tilbyr en unik linje av fluorescent-merket og biotinylerte fibronektiner og lamininer. Flere anvendelser av disse produktene er oppført nedenfor.Søknad # 1: in vitro invadopodia / podosome invasjon analyse (Cat.# FNR01, FNR02, LMN01, LMN02)
Cytoskelettets fluorescentmerkede fibronektiner og lamininer kan brukes i en in vitro invadopodia/podosom invasjonsanalyse (16). Denne analysen tillater en høyoppløselig undersøkelse av lokal celleinvasjon på spesifikke ECM-komponenter og kan brukes til å vurdere det invasive potensialet til celler og å undersøke forbindelser/veier som påvirker dette invasjonsstadiet. Opprinnelig beskrevet Av Artym et al. for gelatin er analysen like anvendelig for fluorescerende fibronektin eller laminin (16).2: Signalveier Involvert I Fibronektinmatriksenhet: Fibrillogenese( Cat.# FNR01, FNR02, FNR03)
I Motsetning til ANDRE ECM-komponenter som kan polymerisere seg selv under fysiologiske forhold, er fibronektinmatriksenheten en celleavhengig prosess. Forstå mekanismene som er involvert I FN-montering og hvordan disse samspillet med cellulære, fibrotiske og immunresponser kan avsløre mål for fremtidig utvikling av terapier for å regulere avvikende vevsreparasjonsprosesser. Også vevsteknikk er sterkt avhengig av evnen til å kontrollere hastigheten og mønsteret AV ECM-formasjonen. Cytoskeletons merkede fibronektiner kan brukes til å overvåke fibrillogenese;
Fluorescerende Fibronektinsubstrater (FNR01 & FNR02)
denne metoden innebærer fluorescerende sporing av fibrildannelse ved inkorporering av fluorescerende fibronektiner (17).omdannelsen av oppløselig fibronektin til uoppløselige fibriller på celleoverflaten kan visualiseres ved å mate cellekultur med medier som inneholder ENTEN TRITC-merket fibronektin (Cat.# FNR01) Eller HiLyte488-merket fibronektin (Cat.# FNR02). Nivået av inkorporert fibronektin kan observeres og kvantifiseres ved fluorescensmikroskopi (18).
Biotinylert Fibronektinsubstrat (FNR03)
denne metoden inkorporerer biotinylert fibronektin i cellene av interesse og kvantiterer vaskemiddeloppløselig (cellebundet) og vaskemiddeloppløselig (fibriller) fibronektin. Denne analysen har blitt brukt med hell for å undersøke Rollen Av Rho-proteiner i fibrillogenese (19).
Søknad # 3: Tissue Engineering Applications (FNR03 & LMN03)
Det har vist seg at biotinylerte ECM-proteiner kan vedta en mer innfødt konformasjon når de er bundet til en streptavidin-overflate, og at dette kan føre til forbedret cellulær binding til ECM (20).