VII.B Vias Ativada pelo Receptor Her2/neu
Receptor de tirosina quinase de sinalização é mediada por uma série de SH2-contendo substratos, incluindo a fosfolipase C-γ (PLC-γ), PI 3-quinase, GTPaseactivating proteína (GAP), o grupo Shc, Grb2, src família de cinases, e SH2 domínio contendo fosfatases. A activação dos substratos da quinase pelo receptor tirosina cinase conduz à libertação de segundos mensageiros, tais como fosfato de inositol e intermediários de diacilglicerol. Além disso, a activação da via Ras pelo receptor tirosina cinase conduz à regulação de uma cascata de proteína serina/treonina, incluindo a via Ras e a via MAP quinase. Eventualmente, a transdução de sinal afeta a transcrição nuclear de genes ou provoca modificações proteicas, que regulam a progressão do ciclo celular e outras atividades celulares. Apresenta-se na Fig. um resumo de várias vias chave de transdução de sinais envolvidas na transformação impulsionada pela sobre-expressão Her2/neu. 4.
Fig. 4. Vias de transdução de sinais, associadas ao Oncogeno Her2/neu. Várias vias de transdução de sinais, que se pensa que contribuem para o potencial transformador de Her2/neu, são ilustradas.
sinalização da tirosina cinase é conhecida por activar múltiplas vias que controlam o crescimento, a proliferação e a sobrevivência. A contribuição relativa de cada via é difícil de determinar e pode ser específica do tipo de célula. A ativação da via cinase do mapa, no entanto, parece ser crítica em muitas situações. Temos mostrado em células transfectadas de vários tipos que os níveis de transformação dos complexos receptores erbB induzem a ativação sustentada e não atenuada das atividades da cinase do mapa. Leder e colegas investigaram a significância de diferentes vias de transdução de sinal examinando o efeito de inibidores farmacológicos específicos da via nas linhas tumorais estabelecidas a partir de modelos transgênicos de ratinho. As linhas de tumores derivadas de ratinhos neu transgénicos mostraram actividade elevada na Via da cinase do mapa.; além disso, o crescimento destas linhas tumorais foi inibido por um inibidor farmacológico da via da MAP quinase, enquanto as linhas tumorais mamárias de origem diferente não foram afetadas por este agente. Estes dados sugerem que a activação do Ras da via cinase do mapa é um componente crítico do crescimento induzido pelo Her2/neu.
demonstrámos que o proteosoma pode desempenhar um papel crítico na regulação do crescimento celular e transformação em tumores que expressam Her2/neu. As células NIH / 3T3 transformadas pela sobreexpressão de p185neu foram tratadas com um anticorpo monoclonal conhecido por conduzir a reversão fenotípica. Estas células tratadas foram comparadas a células não tratadas usando visor diferencial de ARNm, uma técnica de triagem que pode identificar espécies de ARNm que diferem em abundância entre duas amostras. A TBP1, originalmente clonada como uma proteína com elevada homologia à proteína-1 de ligação ao Tat – VIH, demonstrou níveis elevados de mRNA nas células tratadas com anticorpos. Para testar o significado deste resultado, o cDNA TBP1 foi usado para transfectar células transformadas. A expressão TBP1 levou à reversão do fenótipo transformado, medido pela diminuição da proliferação celular, redução da formação de colônias em ágar mole, e muito inibida a formação de tumor em ratos atímicos. Isto identificou um regulador do proteosoma como tendo uma atividade supressora de tumor. Esperamos que a baixa regulação das funções proteosomas limite a degradação dos inibidores do ciclo celular, limitando assim o crescimento celular.
consistente com a ideia de que a regulação do ciclo celular é fundamental para a capacidade transformadora de Her2/neu, cyclin D1 tem sido reconhecida pela sua importância na transformação neu. Lee e colegas notaram que os níveis de proteína D1 de cyclin foram elevados tanto em modelos neu transgênicos de mouse e linhas celulares neu-transformadas. A indução da ciclina D1 pode ser revogada pela mutação de resíduos críticos no interior de Her2/neu. A transformação demonstrou ser inibida in vivo pelo antisense de cyclin D1, uma técnica experimental que, teoricamente, impede especificamente a síntese de uma proteína-alvo. Através da utilização de inibidores predominantemente negativos e farmacológicos das vias do ciclo celular, determinou-se que a indução do cyclin D1 por p185neu dependia da via Ras/MAP cinase, mas não da via PI-3-cinase. Estes experimentos reforçam a importância da via de cinase do mapa e a regulação crítica do controle do ciclo celular por Her2/neu. Embora a via da cinase do mapa tenha sido mostrada como de grande importância para a sinalização erbB, a significância de outras vias de sinalização principais, como a via da PI-3-cinase, não pode de forma alguma ser descartada. Um importante effector a jusante da via PI-3 – kinase, cuja importância foi revelada, é a via Akt survival kinase. Como um efeito downstream de muitos sinais do fator de crescimento, esta via fornece um sinal antiapoptótico. Mendelsohn e colegas demonstraram um papel protector para o FEG a partir de apoptose induzida pelo Af tanto em células de cancro da mama como em células epiteliais humanas normais imortalizadas. A proteção conferida pela estimulação do FEG demonstrou depender da sinalização da Akt. Liu e colegas demonstraram que Heregulin, uma família erbB ligante, leva à ativação da Akt, e, além disso, que a ativação da Akt é bloqueado por um inibidor anticorpo para Her2, revelando um papel para Her2 na ativação da Akt. Temos mostrado que o supressor do tumor BRCA1 é fosforilado em resposta à ativação erbB2, e há algumas evidências de que esta modificação também é influenciada pela sinalização Akt.dados relativos aos efeitos da Her2/neu na quimiossensibilidade e radiosensibilidade não são surpreendentes. É agora evidente que um aspecto importante da matança por agentes quimioterapêuticos e radioterapia é devido à indução de apoptose. As neoplasias gliais de alto grau são particularmente refractárias às estratégias de tratamento padrão e, portanto, qualquer método que possa melhorar essas estratégias de tratamento seria de grande benefício clínico. Temos demonstrado que glial e outras células transformadas por sobre-expressão p185neu podem ser fenotipicamente revertidas pela introdução de um mutante p185 com uma truncação intracelular logo abaixo da membrana, p185T691Stop. Para além de causar reversão fenotípica, o p185t691 desactivação mediada por escalas da cinase sinalizando células sensibilizadas à apoptose induzida pela irradiação γ, um mediador de danos ao ADN. Além disso, esta resposta apoptótica mostrou ser independente do p53, o que é encorajador do ponto de vista clínico, dada a alta proporção de tumores humanos para os quais se acredita que a sobrevivência seja aumentada pela perda da função p53. O tratamento com anticorpos monoclonais a p185neu, como a expressão de um p185 truncado, pode levar a reversão fenotípica e desativação dos receptores de cinase, e será discutido mais tarde. Pietras e colegas demonstraram que o tratamento com este anticorpo conduz a uma diminuição na reparação do ADN, possivelmente devido a uma falha na indução de proteínas reguladoras, como o p21cip. Embora vários grupos tenham demonstrado que a desativação dos receptores de cinase pode aumentar a eficácia dos agentes antitumores, que a sobreexpressão Her2/neu fornece uma quimiorresistência intrínseca permanece controversa. Pegram e colaboradores investigaram esta questão, tanto em cultura de células e em modelos de camundongos e descobriram que Her2/neu sobreexpressão por si só não era suficiente para conferir resistência às drogas e sugeriu que o Her2/neu pode aparecer para dar resistência ao medicamento, devido à mais rápida rebrota de tumores. Coletivamente, no entanto, estudos do papel de Her2 / neu e apoptose sugerem que as vias de sobrevivência são um aspecto crítico da sinalização da tirosina cinase receptora e que este componente da sinalização da tirosina cinase receptora é central para a compreensão dos mecanismos de transformação e reversão fenotípica.