Co-imunoprecipitação (Co-IP)

Introdução

Co-imunoprecipitação, Co-IP em suma, é amplamente aplicado técnica para identificar fisiologicamente relevantes para a proteína-proteína medicamentosas utilizando a proteína alvo de anticorpos específicos para, indiretamente, captura de proteínas que são vinculados a este objectivo específico de proteína. Como uma extensão do IP, o Co-IP pode capturar e purificar não só o alvo primário, mas também outras macromoléculas ligando-se ao alvo por interações nativas. A diferença entre IP e co-IP é o foco da experiência. O IP é focado no alvo primário, que se liga ao anticorpo. Enquanto que, o co-IP tem como alvo os alvos secundários, que interage com as proteínas primárias, em vez de anticorpos. Após a imunoprecipitação, as proteínas presas nas contas são lavadas e eluídas para obter proteínas alvo primárias e secundárias purificadas. Estas proteínas alvo podem ser caracterizadas em vários métodos, tais como a análise WesternBlot e espectral de massa sob estratégia de caçadeira, para identificar identificações de proteínas parceiras, afinidades de ligação, cinética de ligação e funções não descobertas da proteína primária.

fatores Críticos sobre a Co-IP:

Como uma técnica poderosa, Co-IP é utilizado regularmente por bioquímicos para explorar proteína–proteína medicamentosas. Embora a metodologia Co-IP seja direta, identificar interações fisiológicas proteína-proteína através da reação Co-IP não é fácil, devido à instabilidade da interação, ligação não específica aos reagentes IP e contaminação por anticorpos. Todos os problemas acima podem ter efeitos negativos na detecção de interações proteína-proteína. Co-IP de complexos proteicos como o Co-IP depende das interacções proteína-proteína para detectar as proteínas ligadas, a afinidade de ligação e a estabilidade das interacções fisiológicas durante todo o processo Co-IP é muito importante. Tempo de ligação inadequado e etapas de lavagem extensas podem reduzir a eficiência de ligação e causar uma falha na detecção da interação proteica. Portanto, para as proteínas, que se prevê terem afinidade de ligação de semana ou interações dinâmicas, a estabilização antecipada das interações proteína-proteína são necessárias, por exemplo, processos de ligação cruzada podem ser realizados antes do co-IP.interacções inespecíficas a ruptura da membrana celular e das organelas provoca a libertação de uma grande quantidade de proteínas, que são separadas pela fronteira, para entrar em contacto. Portanto, é inevitável que interações inespecíficas, em outras palavras, falsas interações positivas, possam ocorrer, o que interfere com a análise de dados. Isto é especialmente comum para as proteínas que têm se desdobrado ou regiões flexíveis, que são relativamente pegajosas e inespecíficos liga outras proteínas. Formas de reviver tais problemas podem ser a preclearance do lisato usando anticorpos primários para remover proteínas não específicas, e mudando a força iônica do tampão para reduzir a ligação não específica.a proteômica criativa pode fornecer design experimental personalizado e aperfeiçoar parâmetros Co-IP com base nas necessidades dos clientes. Prometemos uma análise Co-IP confiável das interações proteína-proteína com nossos cientistas experientes e técnicos.características do serviço de co-IP:

• estudar as interacções entre proteínas e complexo proteico

monitorizar a dinâmica da interacção proteica

• estudar a interacção proteína-proteína numa condição de não desnaturação, que é quase fisiológica, mapeando os domínios de interacção das proteínas

o nosso serviço de co-IP contém:

• contas, anticorpos, etc.
• Parâmetros de otimização, como a ligação hora
• a lise Celular, IP, lavar & eluição
• WesternBlot/ espectrometria de massa, dependendo do projeto, as necessidades
• análise de Dados & relatório de entrega

Procedimento de compra: