visão geral: com este método vamos criar uma seringa de esporos limpa e livre de contaminantes. A seringa será cheia com água aquecida e esterilizada, permitindo arrefecer. Os esporos serão então transferidos do esporo print para a solução da seringa utilizando um vidro de injecção limpo e desinfectado. Após a conclusão deste Tek, terá criado uma seringa de solução de esporos pronta a ser utilizada em qualquer aplicação microscópica.nota: estas instruções são mais eficazes quando executadas no ambiente mais estéril disponível. O método preferido envolve seguir os passos abaixo enquanto se trabalha em um Glovebox limpo e estéril ou na frente de uma capota laminar fluxo. Se você não deseja construir uma Glovebox, ou não tem uma, os seguintes passos foram realizados com sucesso, trabalhando em uma bancada completamente limpa e desinfectada. Recomenda-se a utilização Liberal de desinfectante e solução diluída de lixívia para limpeza e desinfecção da área de trabalho.
materiais necessários: um frasco de 91% de álcool isopropílico várias toalhas de papel um isqueiro ou chama de álcool um copo de shot de impressão de esporos estéreis Encha o seu pote de cozinha a meio caminho com água da torneira ou destilada (use água destilada se a água da torneira contém níveis mais elevados de minerais e produtos químicos).
2. Ferver a água no pote no alto por um mínimo de dez minutos, isto deve ser adequado para esterilizar e limpar a água de todas as bactérias, vírus, e esporos de mofo.
3. Pegue na sua seringa vazia e encha-a com a água a ferver. Deixe-o sentar-se por dois minutos com a água quente lá dentro. (Se a sua seringa foi embalada com esterilidade, salte os passos 4 e 5).
4. Purgar a água quente da seringa para um lavatório, não voltar para a panela.
5. Repetir os passos 3 e 4 mais duas vezes. Na segunda vez deixe a água quente na seringa.
6. Colocar a seringa num local fresco sem correntes de ar, preferível num saco de fecho de correr limpo
7. Permitir que arrefeça durante várias horas antes de iniciar o procedimento dois. procedimento dois: Transferir esporos de impressão para a seringa
1. Primeiro limpa a tua área de trabalho. Isto pode envolver a limpeza de todas as superfícies de trabalho com uma solução diluída de lixívia e a pulverização da área liberalmente com um desinfectante como o lisol.
2. Coloque os seguintes materiais na sua caixa de luvas ou na superfície de trabalho limpa e sanatizada: o vidro de injecção, as suas seringas arrefecidas, o frasco de álcool, uma toalha de papel, a sua impressão (ainda em saquinho de fecho de correr) e a chama do isqueiro ou do álcool.
3. Lavar as mãos com sabão antibacteriano antes de prosseguir.
4. Dobre a toalha de papel para cima em ¼ de seções e ensopar um canto dela com o álcool.
5. Com a toalha embebida em álcool limpar o interior do copo de shot, essencialmente esterilizando a superfície que você está prestes a usar na transferência. Deixe o copo de shot secar ao ar, deve demorar apenas alguns segundos.
6. Retire a aba protectora da agulha da seringa estéril e esterilize a agulha com chama. Depois, pegue na toalha embebida em álcool e limpe a agulha para ajudar mais na esterilização. Tente evitar que a agulha toque em qualquer outra superfície, salvo instruções em contrário.
7.Nota: neste ponto é importante trabalhar o mais rapidamente possível para ajudar a combater as chances de contaminar moldes e bactérias caindo em sua área de trabalho e, assim, arruinar a sua seringa.
8. Remova a impressão do saco de armazenamento. Desdobra-o para expor os esporos. Comece a raspar ligeiramente, utilizando a agulha da seringa, uma secção da impressão digital no copo de injecção. Para uma impressão de tamanho médio é geralmente adequado para raspar de uma seção não maior do que 1/5 do total da impressão.
9. Você terá uma pequena coleção perceptível de esporos no copo de shot. Agora exponha não mais de metade da água da seringa para o copo de injecção, mexendo levemente os esporos para a solução.
10. Aspire a solução de água do esporo para dentro da seringa. Você pode precisar de expunge um pouco mais de água para o copo de shot e re-sugar para ajudar a capturar todos os esporos para a seringa.
11. Uma vez que tenha a solução de esporos de volta para a seringa, deve notar que a água no seu interior se tornou ligeiramente fumada e que poderá ver pequenos aglomerados de esporos a flutuar na solução. Isso é bom, você completou o processo.
12. Esterilizar a agulha novamente com o toalhete embebido em álcool, repor a aba protectora da agulha e colocar a seringa de novo no seu saco de fecho de correr limpo.
13. Deixar a seringa sentar-se durante pelo menos 12 horas antes de utilizar em aplicação microscópica ou inoculação para variedades comestíveis. Quanto mais velha a impressão usada, mais “desidratados” os esporos se tornarão. Para observação microscópica adequada ou germinação, os esporos terão de ser hidratados.