David a Weitz's Lab

quantificação de moléculas secretadas por células, por exemplo, citocinas, é fundamental para a caracterização das respostas imunitárias. Os testes de captura de citoquinas que usam anticorpos projetados para ancorar as moléculas segregadas para as células secretoras são amplamente utilizados para caracterizar as respostas imunitárias, pois permitem tanto a identificação sensível quanto a recuperação de células respondentes viáveis. No entanto, se as citocinas se difundirem das células secretoras, as células não secretoras também serão identificadas como células respondentes. Aqui nós encapsulamos as células imunes em gotículas microfluídicas e realizamos testes de captura de citoquinas em gotículas internas para limitar a difusão das citoquinas secretadas. Usamos dispositivos microfluídicos para encapsular rapidamente células NK-92 e as células K562 em gotículas microfluídicas. Realizamos ensaios de captura IFN-γ In-droplet e demonstramos que as células NK-92 MI reconhecem as células alvo dentro das gotículas e se tornam ativadas para segregar IFN-γ. A encapsulação de gotículas previne a difusão de produtos secretados para as células vizinhas e reduz drasticamente tanto falsos positivos como falsos negativos, em relação aos ensaios realizados sem gotículas. Em uma amostra contendo 1% de positivos verdadeiros, encapsulamento reduz, de 94% para 2%, o número de verdadeiro-positivos células que aparecem como negativos; em uma amostra contendo 50% de positivos verdadeiros, o número de não-estimulado células que aparecem como pontos positivos é reduzido de 98% para 1%. Após as células serem libertadas das gotículas, a citocina secretada permanece capturada nas células imunitárias secretoras, permitindo o isolamento de populações altamente enriquecidas para as células imunitárias efectoras activadas. A encapsulação de gotículas pode ser usada para reduzir o fundo e melhorar a detecção de qualquer doseamento de secreção celular.

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