Descrição
Thermo Scientific Pierce Reagente de Ellman (DTNB) reage com sulfhydryl grupos para produzir uma cor do produto, proporcionando um método confiável para medir a redução de cysteines e outras sulfhydryls em solução.
o reagente de Ellman (5,5′-ditio-bis-) é usado para estimar grupos sulfidrilo em uma amostra, comparando com uma curva padrão de um composto contendo sulfidrilo, como cisteína. Em alternativa, os grupos sulfidrilo podem ser avaliados utilizando o coeficiente de extinção do TNB (14,150 M-1 cm-1 a 412nm). O reagente de Ellman tem sido usado para outras aplicações que não a estimativa de sulfidril, tais como para determinar alquiltióis por HPLC usando um procedimento de derivatização pré-coluna e para estudar tióis no local ativo de várias enzimas.
Características do Reagente de Ellman:
• Sulfhydryl ensaio—reage quantitativamente com livre (reduzida) sulfhydryl grupos (—SH) para produzir detectáveis TNB produto
• detecção Colorimétrica cor—de-produto permite a medição espectrofotométrica em recipientes ou microplacas (λmax = 412nm; ε = 14,150/M·cm)
• método Comprovado—o bem-caracterizados química fornece quantificação de peptídeo ou proteína sulfhydryl grupos usando a extinção do coeficiente de cálculo ou por comparação com um padrão de cisteína
Reagente de Propriedades de
• nomes Alternativos: DTNB, Reagente de Ellman
• nome Químico: 5,5′-dithio-bis-(2-nitrobenzoic)
• Reativa direção: Sulfhydryl grupos (—SH)
• fórmula Química: C14H8N2O8S2
• número CAS: 69-78-3
• peso Molecular: 396.35
• Formulário: O pó cristalino amarelo DTNB reage com um grupo sulfidril livre, produzindo um dissulfureto misto e ácido 2-nitro-5-tiobenzóico (TNB). O alvo da DTNB nesta reação é a base conjugada (R—S-) de um grupo livre de sulfidrilo. Portanto, a taxa desta reação é dependente de vários fatores: (1) o pH da reação, (2) o pKa’ do sulfidril e (3) efeitos estéricos e eletrostáticos. TNB é a espécie colorida produzida nesta reação e tem um alto coeficiente de extinção molar na faixa visível. O coeficiente de extinção molar de TNB foi originalmente relatado por Ellman (1959) para ser 13.600 m-1 cm-1 a 412 nm e pH 8.0. Consequentemente, este valor tem sido frequentemente citado na literatura. Estudos posteriores mostraram, no entanto, que o coeficiente de extinção molar é refletido com mais precisão por um valor de 14.150 m-1 cm-1 a 412 nm. A extinção do TNB não é afetada por mudanças de pH entre 7.6 e 8.6. No entanto, a extinção do TNB é diferente em outros solventes.