O ensaio clonogénico

a experiência envolve três etapas principais:

  1. o tratamento é aplicado a uma amostra de células.as células são “banhadas” num vaso de cultura de tecidos e podem crescer.as colónias produzidas são fixas, manchadas e contadas.no final da experiência, mede-se a percentagem de células que sobreviveram ao tratamento. Uma representação gráfica da sobrevivência versus concentração de drogas ou dose de radiação ionizante é chamada de curva de sobrevivência celular.

    para os ensaios de partículas que matam células, a fracção sobrevivente de células é utilizada para aproximar a distribuição de poisson de partículas virais entre as células e, portanto, determinar o número de CKPs encontrados por cada célula.

    qualquer tipo de célula pode ser usado em um experimento, mas como o objetivo destes experimentos em pesquisa oncológica é a descoberta de tratamentos de câncer mais eficazes, as células tumorais humanas são uma escolha típica. As células ou vêm de “linhas celulares” preparadas, que foram bem estudadas e cujas características gerais são conhecidas, ou de uma biópsia de um tumor em um paciente. As células são colocadas em placas de petri ou em placas que contêm vários poços circulares.”Números particulares de células são banhadas dependendo do experimento; para um experimento que envolve irradiação é usual placas de maior número de células com dose crescente de radiação. Por exemplo, na dose de 0 ou 1 gray de radiação, 500 células pode ser chapeado, mas em 4 ou 5 cinza, 2500 pode ser chapeado, desde muito grandes números de células são mortas a este nível de radiação e os efeitos do tratamento específico seria não observáveis.a contagem das Colónias celulares é geralmente feita ao microscópio e é bastante tediosa. Recentemente, foram desenvolvidas máquinas que usam algoritmos para analisar imagens. Estes são capturados por um scanner de imagem ou um microscópio automatizado que pode automatizar completamente o processo de contagem. Uma dessas máquinas automatizadas funciona aceitando certos tipos de placas de células através de um slot (não diferente de um leitor de CD), tirando uma fotografia, e upload para um computador para análise imediata. Contagens confiáveis estão disponíveis em segundos.

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