introducere
Co-imunoprecipitarea, Co-IP pe scurt, este o tehnică aplicată pe scară largă pentru a identifica interacțiunile proteină-proteină relevante fiziologic prin utilizarea anticorpilor specifici proteinei țintă pentru a capta indirect proteinele care sunt legate de această proteină țintă specifică. Ca o extensie a IP, Co-IP poate capta și purifica nu numai ținta primară, ci și alte macromolecule care se leagă de țintă prin interacțiuni native. Diferența dintre IP și co-IP este punctul central al experimentului. IP este axat pe ținta primară, care leagă anticorpul. În timp ce, Co-IP vizează țintele secundare, care interacționează cu proteinele primare, în loc de anticorpi. După imunoprecipitare, proteinele prinse pe margele sunt spălate și eluate pentru a obține proteine țintă primare și secundare purificate. Aceste proteine țintă pot fi caracterizate prin diferite metode, cum ar fi analiza WesternBlot și mass spec sub strategia shotgun, pentru a identifica ID-urile proteinelor partenere, afinitățile de legare, cinetica funcțiilor de legare și nedescoperite ale proteinei primare.
factori critici despre Co-IP:
ca tehnică puternică, Co-IP este utilizat în mod regulat de biochimiști pentru a explora interacțiunile proteine-proteine. În timp ce metodologia Co-IP este simplă, identificarea interacțiunilor fiziologice proteină-proteină prin reacția Co-IP nu este ușoară, din cauza instabilității interacțiunii, a legării nespecifice la reactivii IP și a contaminării cu anticorpi. Toate problemele de mai sus pot avea efecte negative asupra detectării interacțiunilor proteine-proteine.
Co-IP a complexelor proteice
deoarece Co-IP depinde de interacțiunile proteină-proteină pentru a detecta proteinele legate, afinitatea de legare și stabilitatea interacțiunilor fiziologice pe parcursul întregului proces Co-IP sunt foarte importante. Timpul de legare inadecvat și etapele extinse de spălare pot reduce eficiența legării și pot provoca o defecțiune a detectării interacțiunii proteice. Prin urmare, pentru proteinele, despre care se preconizează că au afinitate de legare săptămânală sau interacțiuni dinamice, este necesară stabilizarea în avans a interacțiunilor proteină-proteină, de exemplu, procesele de reticulare pot fi efectuate înainte de Co-IP.
interacțiuni nespecifice
ruperea membranei celulare și a organitelor determină eliberarea unei cantități mari de proteine, care sunt separate de limită, să intre în contact. Prin urmare, este inevitabil să apară interacțiuni nespecifice, cu alte cuvinte, interacțiuni fals pozitive, care interferează cu analiza datelor. Acest lucru este deosebit de frecvent pentru proteinele care au regiuni desfăcute sau flexibile, care sunt relativ lipicioase și leagă nespecific alte proteine. Modalitățile de a retrăi astfel de probleme pot fi preclearance de lizat folosind anticorpi primari pentru a elimina proteinele nespecifice și schimbarea puterii ionice a tamponului pentru a reduce legarea nespecifică.
proteomica creativă poate oferi un design experimental personalizat și poate rafina parametrii Co-IP în funcție de nevoile clienților. Promitem o analiză Co-IP fiabilă a interacțiunilor proteine-proteine cu oamenii de știință și tehnicienii noștri experimentați.
caracteristici ale serviciului Co-IP:
- studiați interacțiunile dintre proteine și complexul proteic
- monitorizați dinamica interacțiunii proteice
- studiați interacțiunea proteină-proteină într-o stare care nu denaturează, care este aproape fiziologică
- cartografierea domeniilor de interacțiune ale proteinelor
serviciul nostru Co-IP conține:
- proiectarea experimentului pe baza nevoilor specifice ale proiectului dvs.: tampoane, margele, anticorpi, etc.
- optimizarea parametrilor, cum ar fi timpul de legare
- liza celulelor, IP, spălare & eluție
- WesternBlot/ spectrometrie de masă, în funcție de nevoile proiectului
- analiza datelor & livrare raport
procedura de comanda:
