Prezentare generală: cu această metodă vom crea un curat și fără contaminanți sport seringă umplută. Seringa va fi umplută cu apă încălzită și sterilizată și lăsată să se răcească. Sporii vor fi apoi transferați din imprimarea sporilor în soluția seringii folosind un pahar împușcat curățat și igienizat. La finalizarea acestui Tek va fi creat un spore soluție seringă gata de utilizare în orice aplicație microscopie.
Notă: Aceste instrucțiuni sunt cele mai eficiente atunci când sunt efectuate în cel mai steril mediu disponibil. Metoda preferată implică urmarea pașilor de mai jos în timp ce lucrați într-o cutie de mănuși curată și sterilă sau în fața unei hote cu flux laminar. Dacă nu doriți să construiți o cutie de mănuși sau nu aveți una, următorii pași au fost efectuați cu succes lucrând pe un blat bine curățat și igienizat. Utilizarea liberală a dezinfectantului prin pulverizare și a soluției de înălbitor diluat este recomandată pentru curățarea și igienizarea zonei de lucru.
materiale necesare: două litru (sau mai mare) oală de gătit
O sticlă de 91% alcool izopropilic
Mai multe prosoape de hârtie
O flacără brichetă sau alcool
un pahar împușcat
steril spori de imprimare
procedura unu: a face o seringă sterilă
1. Umpleți vasul de gătit la jumătate cu robinet sau apă distilată (utilizați apă distilată dacă apa de la robinet conține niveluri mai ridicate de minerale și substanțe chimice).
2. Fierbeți apa în oală la maxim timp de cel puțin zece minute, aceasta ar trebui să fie adecvată pentru a steriliza și curăța apa de toate bacteriile, virușii și sporii mucegaiului.
3. Luați seringa goală și umpleți-o cu apă clocotită. Lăsați-l să stea două minute cu apa fierbinte înăuntru. (Dacă seringa a fost ambalată pentru sterilitate, săriți pașii 4 și 5).
4. Purjați apa fierbinte din seringă într-o chiuvetă, nu înapoi în cratiță.
5. Repetați pașii 3 și 4 încă de două ori. La a doua oară, lăsați apa fierbinte în seringă.
6. Așezați seringa într-un loc răcoros, fără curenți, de preferat într-o pungă curată cu fermoar
7. Lăsați-l să se răcească câteva ore înainte de a trece la procedura a doua.
procedura doi: Transferarea sporilor de imprimare în seringă
1. Mai întâi curățați zona de lucru. Acest lucru poate implica ștergerea tuturor suprafețelor de lucru cu o soluție diluată de înălbitor și pulverizarea zonei în mod liber cu un dezinfectant, cum ar fi Lysol.
2. Așezați următoarele materiale în cutia de mănuși sau pe suprafața de lucru curățată și igienizată: sticla împușcată, seringile răcite, sticla de alcool, un prosop de hârtie, amprenta (încă în baggie cu fermoar) și bricheta sau flacăra cu alcool.
3. Spălați-vă mâinile cu săpun antibacterian înainte de a continua.
4. Îndoiți prosopul de hârtie în secțiuni de un sfert și înmuiați un colț al acestuia cu alcoolul.
5. Cu prosopul îmbibat cu alcool ștergeți interiorul sticlei împușcate, sterilizând în esență suprafața pe care urmează să o utilizați în transfer. Lăsați sticla împușcată să se usuce la aer, ar trebui să dureze doar câteva secunde.
6. Scoateți apărătoarea acului din seringa sterilă și sterilizați cu flacără acul. Apoi luați prosopul de hârtie îmbibat cu alcool și ștergeți acul pentru a ajuta în continuare la sterilizare. Încercați să evitați ca acul să atingă orice altă suprafață, cu excepția cazului în care vi se recomandă altfel.
7.Notă: în acest moment este important să lucrați cât mai repede posibil pentru a ajuta la combaterea șanselor de contaminare a mucegaiurilor și a bacteriilor care cad în zona dvs. de lucru și, prin urmare, să vă distrugeți seringa.
8. Scoateți imprimarea din bagajul de depozitare. Desfaceți-l pentru a expune sporii. Începeți ușor să răzuiți, folosind acul seringii, o secțiune a imprimării în geamul împușcat. Pentru o imprimare de dimensiuni medii, este de obicei adecvat să răzuiți o secțiune nu mai mare de 1/5 din imprimarea totală.
9. Veți avea o mică colecție vizibilă de spori în paharul împușcat. Acum nu scoateți mai mult de jumătate din apa din seringă în paharul împușcat, amestecând ușor sporii în soluție.
10. Aspirați soluția de apă de spori în seringă. Este posibil să fie nevoie să eliminați mai multă apă în paharul împușcat și să sugeți din nou pentru a ajuta la captarea tuturor sporilor în seringă.
11. Odată ce aveți soluția de spori înapoi în seringă, ar trebui să observați că apa din interior a devenit ușor colorată și este posibil să vedeți mici grupuri de spori plutind în soluție. Acest lucru este bun, ați finalizat procesul.
12. Sterilizați din nou acul cu prosopul de hârtie îmbibat cu alcool, înlocuiți apărătoarea acului și puneți seringa înapoi în punga curată cu fermoar.
13. Lăsați seringa să stea timp de cel puțin 12 ore înainte de a fi utilizată în microscopie sau inoculare pentru soiuri comestibile. Cu cât imprimarea este mai veche, cu atât sporii vor deveni mai „deshidratați”. Pentru observarea sau germinarea adecvată a microscopiei, sporii vor trebui lăsați să se rehidrateze.