David a Weitz's Lab

cuantificarea moleculelor secretate de celule, de exemplu citokine, este fundamentală pentru caracterizarea răspunsurilor imune. Testele de captare a citokinelor care utilizează anticorpi proiectați pentru a ancora moleculele secretate la celulele secretoare sunt utilizate pe scară largă pentru a caracteriza răspunsurile imune, deoarece permit atât identificarea sensibilă, cât și recuperarea celulelor viabile care răspund. Cu toate acestea, dacă citokinele se difuzează departe de celulele secretoare, celulele nesecretoare vor fi, de asemenea, identificate ca celule care răspund. Aici încapsulăm celulele imune în picături microfluidice și efectuăm teste de captare a citokinelor în picături pentru a limita difuzia citokinelor secretate. Folosim dispozitive microfluidice pentru a încapsula rapid celulele unice NK-92 MI ucigașe naturale și celulele lor țintă K562 în picături microfluidice. Efectuăm teste de captare IFN-in-Droplet și demonstrăm că celulele NK-92 MI recunosc celulele țintă din picături și devin activate pentru a secreta IFN-XV. Încapsularea picăturilor previne difuzia produselor secretate către celulele vecine și reduce dramatic atât falsurile pozitive, cât și falsele negative, în raport cu testele efectuate fără picături. Într-un eșantion care conține 1% pozitive adevărate, încapsularea reduce, de la 94% la 2%, Numărul de celule pozitive adevărate care apar ca negative; într-un eșantion care conține 50% pozitive adevărate, numărul de celule ne-stimulate care apar ca pozitive este redus de la 98% la 1%. După ce celulele sunt eliberate din picături, citokina secretă rămâne capturată pe celulele imune secretoare, permițând izolarea FACS a populațiilor foarte îmbogățite pentru celulele imune efectoare activate. Încapsularea picăturilor poate fi utilizată pentru a reduce fundalul și pentru a îmbunătăți detectarea oricărui test de secreție cu o singură celulă.

Lasă un răspuns

Adresa ta de email nu va fi publicată.