descriere
Thermo Scientific reactivul lui Pierce Ellman (DTNB) reacționează cu grupările sulfhidril pentru a produce un produs colorat, oferind o metodă fiabilă pentru măsurarea cisteinelor reduse și a altor sulfhidrili liberi în soluție.reactivul lui Ellman (5,5 ‘ – dithio-bis -) este utilizat pentru a estima grupările sulfhidril într-o probă prin compararea cu o curbă standard a unui compus care conține sulfhidril, cum ar fi cisteina. Alternativ, grupările sulfhidril pot fi testate folosind coeficientul de extincție al TNB (14.150 m-1 cm-1 la 412nm). Reactivul lui Ellman a fost utilizat pentru alte aplicații decât estimarea sulfhidrilului, cum ar fi pentru determinarea alchiltiolilor prin HPLC folosind o procedură de derivatizare pre-coloană și pentru a studia tiolii în locul activ al mai multor enzime.
caracteristici ale reactivului Ellman: r• * analiza sulfhidril-reacționează cantitativ cu grupări sulfhidril libere (reduse) (—SH) pentru a produce produs TNB detectabil
* detectare colorimetrică-produsul colorat permite măsurarea spectrofotometrică în cuve sau microplăci (inktimmax = 412nm; 14.150/m·cm)
• metoda dovedită—chimia bine caracterizată asigură cuantificarea grupărilor peptidice sau proteice sulfhidril folosind calculul coeficientului de extincție sau prin comparație cu un standard de cisteină proprietățile reactivului
• Nume Alternative: Dtnb, reactivul lui Ellman
• Denumire chimică: 5,5′-dithio-bis-(acid 2-nitrobenzoic)
• Reactiv către: grupări sulfhidril (- SH)
• formula chimică: c14h8n2o8s2• număr CAS: 69-78-3• greutate moleculară: 396.35• formă: Pulbere cristalină galbenă
dtnb reacționează cu o grupare sulfhidril liberă pentru a produce o disulfură mixtă și acid 2-nitro-5-tiobenzoic (TNB). Ținta DTNB în această reacție este baza conjugată (R—S-) a unei grupări sulfhidril libere. Prin urmare, viteza acestei reacții depinde de mai mulți factori: (1) pH-ul reacției, (2) pKa’ al sulfhidrilului și (3) efectele sterice și electrostatice. TNB este specia colorată produsă în această reacție și are un coeficient ridicat de extincție molară în intervalul vizibil. Coeficientul de extincție molară al TNB a fost raportat inițial de Ellman (1959) la 13.600 m-1 cm-1 la 412 nm și pH 8,0. În consecință, această valoare a fost citată frecvent în literatura de specialitate. Studiile ulterioare au arătat totuși că coeficientul de extincție molară este reflectat mai precis de o valoare de 14.150 m-1 cm-1 la 412 nm. Extincția TNB nu este afectată de modificările pH-ului între 7,6 și 8,6. Cu toate acestea, dispariția TNB este diferită în cazul altor solvenți.