inocularea
tehnicienii de laborator inoculează proba Pe anumite plăci solide de agar cu metoda streak plate sau în mediu de cultură lichid, în funcție de obiectivul izolării:
- dacă se dorește izolarea numai a unui anumit grup de bacterii, cum ar fi streptococul de grup A dintr-un tampon de gât, se poate utiliza un mediu selectiv care va suprima creșterea bacteriilor concomitente așteptate în amestec (prin antibiotice prezente în agar), astfel încât numai streptococii să poată fi izolați sunt „selectate”, adică se remarcă vizibil. Pentru a izola ciupercile, se poate folosi agar Sabouraud. Alternativ, condițiile letale pentru streptococi și bacterii gram negative, cum ar fi concentrațiile mari de sare din agar de sare de manitol, favorizează supraviețuirea oricărui stafilococ prezent într-o probă de bacterii intestinale, iar roșu de fenol din agar acționează ca un indicator al ph-ului care arată dacă bacteriile sunt capabile să fermenteze manitolul prin excretarea acidului în mediu. În alte substanțe agar sunt adăugate pentru a exploata capacitatea unui organism de a produce un pigment vizibil (de ex. mediu granada pentru streptococul din grupa B) care schimbă culoarea coloniei bacteriene sau pentru a dizolva agarul de sânge prin hemoliză, astfel încât să poată fi mai ușor reperat. Unele bacterii, cum ar fi speciile Legionella, necesită anumiți nutrienți sau legarea toxinelor ca în cărbune pentru a crește și, prin urmare, trebuie utilizate medii precum Agar de extract de drojdie de cărbune tamponat.
- dacă doriți să izolați cât mai multe sau toate tulpinile posibile, trebuie inoculate diferite medii nutritive, precum și medii îmbogățite, cum ar fi agar de sânge și agar de ciocolată și medii de cultură anaerobe, cum ar fi bulionul de tioglicolat. Pentru a enumera creșterea, bacteriile pot fi suspendate în agar topit înainte de a deveni solide și apoi turnate în vase petri, așa-numita ‘metoda plăcii de turnare’ care este utilizată în microbiologia mediului și microbiologia alimentelor (de exemplu, testarea produselor lactate) pentru a stabili așa-numitul ‘număr de plăci aerobe’.
IncubationEdit
după ce eșantionul este inoculat în sau pe mediul de alegere, acestea sunt incubate în condiții atmosferice adecvate, cum ar fi condiții aerobe, anaerobe sau microaerofile sau cu adaos de dioxid de carbon (5%), la diferite setări de temperatură, de exemplu 37 CTC într-un incubator sau într-un frigider pentru îmbogățire la rece, sub o lumină adecvată, de exemplu strict fără lumină învelită în hârtie sau într-o sticlă întunecată pentru micobacterii scotocromogene și pentru perioade diferite de timp, deoarece diferite bacterii cresc într-un incubator sau într-un frigider pentru îmbogățire la rece, sub o lumină adecvată, de exemplu strict fără lumină învelită în hârtie sau într-o sticlă întunecată pentru micobacterii scotocromogene și pentru perioade diferite de timp, deoarece bacteriile diferite cresc într-un incubator viteză diferită, variabilă de la ore (Escherichia coli) până la săptămâni (de exemplu micobacterii).
la intervale regulate, în serie, tehnicienii de laborator și microbiologii inspectează mediul pentru semne de creștere vizibilă și o înregistrează. Inspecția trebuie să aibă loc din nou în condiții care favorizează supraviețuirea izolatului, adică într-o cameră anaerobă pentru bacteriile anaerobe, de exemplu, și în condiții care nu amenință persoana care privește plăcile să nu fie infectată de un microb deosebit de infecțios, adică într-un cabinet de siguranță biologică pentru Yersinia pestis (ciumă) sau Bacillus anthracis (antrax), de exemplu.
identificare
când bacteriile au crescut vizibil, ele sunt adesea încă amestecate. Identificarea unui microb depinde de izolarea unei colonii individuale, deoarece testarea biochimică a unui microb pentru a determina diferitele sale trăsături fiziologice depinde de o pură culture.To faceți o subcultură, una funcționează din nou în tehnica aseptică în microbiologie, ridicând o singură colonie de pe suprafața agarului cu o buclă și dungă materialul în cele 4 cadrane ale unei plăci de agar sau peste tot dacă colonia era singulară și nu părea amestecată.
gram colorarea probei brute înainte de incubare sau colorarea materialului de colonie proaspăt crescut ajută la determinarea dacă o colonie constă din bacterii care apar uniform sau este amestecată, iar culoarea și forma bacteriilor permit o primă clasificare bazată pe morfologie. În microbiologia clinică sunt utilizate numeroase alte tehnici de colorare pentru anumite organisme (pata bacteriană rapidă acidă pentru micobacterii). Tehnicile de colorare imunologică, cum ar fi imunofluorescența directă, au fost dezvoltate pentru agenții patogeni importanți din punct de vedere medical care cresc lent (pata Auramină-rodamină pentru micobacterii) sau dificil de cultivat (cum ar fi speciile Legionella pneumophila) și unde rezultatul testului ar modifica managementul standard și terapia empirică.
testarea biochimică a bacteriilor implică un set de Agari în flacoane pentru a separa motilul de non-motil bacteria.In 1970 a fost dezvoltată o versiune miniaturizată, numită Indicele profilului analitic.
identificarea cu succes prin e. g. secvențierea genomului și genomica depind de culturi pure.