experimental
etichetarea RuBisCo:
Aedans(454): donator F(58): acceptor
studii de legare:
Termeni:
ADP bullet: complex GroEL legat de GroES și ADP
ApoGroEL: doar GroEL comlex (utilizat în studiile anterioare de legare a substratului rubisco)
lin și colab. stabilit că:
1. A existat o diferență în FRET la legarea substratului la inelul trans al glonțului ADP vs.inelul apoGroEL.
– acest lucru a fost evident prin stingerea fluorescenței donatorului (B.)
– aceasta a indicat o diferență în conformația substratului proteic.
 |
 |
2. S-a găsit o desfășurare „pasivă” a proteinelor substratului legate de inelul apoGroEL.
– Cu toate acestea, această desfășurare a avut loc mult mai lent decât ciclul de reacție funcțională GroEL lui.
3. Există o desfășurare mai puțin „pasivă” a substratului legat de inelul trans-glonț ADP.
– A confirmat acest lucru cu studii de digestie protează.
– Cu toate acestea, Acesta este complexul mai relevant din punct de vedere fiziologic.
– deci este acesta un nivel maxim eficient sau doar primul pas în ciclul de reacție?
pentru a testa relevanța fiziologică, au adăugat ATP la reacția glonțului ADP și au monitorizat FRET
 |
la adăugarea ATP, au găsit: – o expansiune inițială rapidă, forțată a conformației a substratului – și apoi o fază de compactare mai lentă – evidentă în figura b |
 |
 |
-figura C indică faptul că cinetica fazei de compactare este dependentă de concentrația Groes, ceea ce înseamnă că este dependentă de mecanismul de castrare al complexului.
– în timp ce faza de expansiune este independentă de concentrația GroES.
încheiat există două faze de desfășurare:
– lent pasiv desfășurarea din cauza substrat se leagă de inel trans a camerei GroEL(de la primul experiment de legare)
– rapid, ATP condus desfășurarea din cauza schimbării de conformație a camerei GroEL.
desfășurarea rapidă nu este dependentă de GroES:
– un exces al unei variante GroEL cu un singur inel, SR1 a fost folosit ca o capcană GroES.
– SR1 nu este capabil să lege substratul și să catalizeze o reacție de desfășurare, dar este capabil să lege și să sechestreze GroES pentru a determina dependența reacției de sechestrarea substratului.
– au stabilit că desfășurarea rapidă monitorizată de FRET a avut loc fără capacul GroES prezent, iar faza de compactare ulterioară nu a avut loc.
– aceasta indică faptul că faza de expansiune rapidă depinde de schimbarea conformației GroEL indusă de legarea ATP.
deci .. este necesară desfășurarea substratului pentru plierea productivă?
– este acesta un pas esențial și important pentru mecanismul de pliere GroEL/GroES?
– au descoperit că fracțiunea de RuBisCo non-nativ care apare înstarea nativă este proporțională cu gradul de desfășurare.-pentru a examina acest lucru, au vrut să măsoare desfășurarea lentă și pasivă a substratului datorită legării GroEL singur(nu depinde de ATP) – au folosit din nou legarea SR1 la substrat, de data aceasta nu ca atrap, ci ca un situs de legare cu desfășurare pasivă pentru substrat.
– timpul de incubare cu SR1 este corelat cu cantitatea de desfășurare, deoarece desfășurarea se datorează numai legării substratului.
– au stabilit că există o corelație între cantitatea de desfășurare a proteinei native.
– deci desfășurarea forțată a GroEL/GroES este o modalitate eficientă de a promova mecanismul de desfășurare necesar pentru plierea corectă a proteinelor.
 |
 |
 |
 |