Medicină Experimentală și terapeutică

Introducere

astmul bronșic este o boală cronică inflamatorie a căilor respiratorii care implică multe celule inflamatorii și mediatori. Celulele T, în special T helper (Th)1 și Th2. au un rol crucial îninducerea inflamației căilor respiratorii la pacienții astmatici (1). Răspunsurile imune complicate sunt capabile să inducă deficiența Th1 și hiperactivitatea Th2, ceea ce duce la un dezechilibru Th1/Th2. Acest dezechilibru promovează Esecreția imunoglobulinei (Ig) și sensibilizează mastocitele și eozinofilele prin secreția alterată de citokine și provoacă inflamații alergice și hiper-reacție a căilor respiratorii (2,3).Interferonul (IFN)-XV și interleukina (IL)-4 sunt citokine tipice ale th1 și, respectiv, Th2.

la pacienții cu astm bronșic, inflamația persistentă a căilor respiratorii este inițiată de celulele prezentatoare de antigen (APC), care integrează diferiți alergeni într-un semnal pentru celulele T și primează răspunsurile imune ulterioare (4,5).Activarea celulelor T necesită semnale care sunt inițiate prin complexul theTCR și cluster de diferențiere (CD)28. Celulele dendritice Mature (MDC) exprimă niveluri ridicate ale moleculelor co-stimulatoare D80 și CD86, care furnizează semnalul necesar pentru activarea, expansiunea și diferențierea celulelor T prininteracțiunea cu CD28 (6). Studiile anterioare au demonstrat că nivelurile de CD80 și CD86 sunt pacienți internați cu astm (7,8).

în studiile anterioare care au investigat modelele astmatice,s-a demonstrat că MDC-urile induc polarizarea Th2, reglează în sus IL-4secreția, reglează în jos producția IFN-inkt și induc inflamația eozinofilică (9,10). Cu toate acestea, studiile care investighează efectele eliminării CD80 și CD86 în DCs asupra diferențierii și secreției de citokine de către celulele T helper din modelele de astm bronșic lipsesc.

în studiul de față, semnalele co-stimulatoare de activare a celulelor T au fost blocate prin suprimarea expresiei Cd80 și CD86molecule pe DCs folosind ARN interferent mic (siARN) și au fost evaluate efectele knockdown-ului CD80 și CD86 asupra nivelurilor de Expresie ale citokinelor tipice Th1 / Th2 IFN-si-4. Astfel, a fost investigat potențialul CD80 și CD86 ca ținte pentru aplicarea interferenței ARNr (ARN) în direcționarea terapeutică a astmului.

materiale și metode

animale

un total de 20 de șoareci sănătoși fără agenți patogeni specifici (6-8 săptămâni; greutate medie, 18 2 g) au fost achiziționate de lacentrul animalelor experimentale de la Universitatea Sun Yat-Sen(Guangzhou, China). Experimentele au fost efectuate în conformitate cuprotocoli aprobați de Comitetul de studii pe animale al Universității Sun Yat-SenUniversity.

modele de astm

un total de 20 de șoareci au fost repartizați aleatoriu la douăgrupuri: i) grupul astmatic și ii) controlul normal group.In grupul astmatic, fiecare șoarece a fost sensibilizat la ovalbumină (ovule; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, SUA) intraperitoneal în zilele1, 14 și 21, cu 100 de ovule de la un hectolitru care a fost emulsionat în alum de 20 mg(Guangzhou Chemical Reactiv Co., Guangzhou, China). Ulterior, șoarecii au fost expuși la o provocare cu aerosoli de 5% ovule timp de 30min / zi în recipiente etanșe (cu dimensiunile de 50 X. O. 50 X. O. 50 cm) în zilele 28-34. În grupul de control normal, șoarecii au fost sensibilizați și provocați ca mai sus cu o cantitate echivalentă de soluție salină în locul soluției de proteine ovule. La 24 de ore după ultima provocare, șoarecii au fost sacrificați printr-o procedură de dislocare cervicală aprobată, efectuată de personal calificat și complet instruit. Plămânii au fost îndepărtați și apoi fixați în etanol 10% Timp de 24 de ore.probele au fost deshidratate, încorporate în parafină și colorate cu hematoxilină și eozină, așa cum s-a descris anterior (11). Modificări patologice în bronșice șițesuturile pulmonare au fost evaluate în cadrul unui microscop Nikon Eclipse Ti light (Nikon Corporation, Tokyo, Japonia).

separarea DCS derivată din măduva osoasă

toți șoarecii au fost sacrificați prin dislocarea cervicală la 24 de ore după provocarea finală. Măduva osoasă a fost spălată din thefemurs și tibiae cu mediu de cultură RPMI-1640 (Gibco; ThermoFisher Scientific, Inc., Waltham, MA, Statele Unite ale Americii). După centrifugarea la 250 de grame la sută timp de 5 minute, celulele au fost tratate cu tampon de liză a celulelor roșii din sânge (RBC) (Cwbio Co., Ltd., Beijing, China), spălată cu soluție salină tamponată cu fosfat (PBS), centrifugată la 250 g pentru 5 minute și cultivată în RPMI-1640 suplimentată cu factor de stimulare a coloniilor de granulocite macrofage recombinante (rmGM-CSF;Peprotech, Inc., Rocky Hill, NJ, SUA; 10 ng/ml) și rmIL-4(Peprotech; 10 ng / ml) au fost utilizate la rândul lor. După 6 zile de cultură, s-a adăugat 1 hectolitru/ml lipopolizaharidă (LPS; Sigma-Aldrich), iar apoi s-au recoltat cmd neaderente în ziua 7. DC-urile au fost colorate la 4 CT sau 30 min cu izotiocianat de fluoresceină (FITC)-conjugathamster Anti-CD11c (5%/ml; 11-0114), ficoeritrin (PE)-hamster conjugat anti-CD80 (5%/ml; 12-0801), FITC-conjugatatrat anti-CD86 (5%/ml; 11-0862) și pe-șobolan conjugat anti-CD complexul majorhistocompatibility (MHC) II (5%/ml; 12-5322; allebioscience, Inc., San Diego, CA, SUA) anticorpi monoclonali și au fost ulterior analizați prin citometrie în flux (bd FACSVerse; BDBiosciences, Franklin Lakes, NJ, SUA) pentru a determinarata de Expresie pozitivă a expresiei antigenului marcat.

siARN și transfecție

secvențele specifice de siARN (tabelul I) care vizează CD80 și CD86 au fost proiectate și selectate în conformitate cu metodele Gu și colab. (12). Toate siRNA au fost achiziționate de lashanghai GenePharma Co., Ltd. (Shanghai, China). Transfectionstep a fost efectuată în conformitate cu protocolul producătorului forLipofectamine 2000 (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.).Pe scurt, DC-urile au fost cultivate într-o placă de cultură tisulară cu 24 de puțuri la o densitate de 1 105 celule/godeu în ziua anterioară transfecției. Topreparare complexe lipid-siARN, 3 unktil Lipofectamină 2000 a fostincubat în 50 unktil Opti-MEM (Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc.) la temperatura camerei timp de 5 min, iar 12 unqtl din siARN indicat a fost combinat în prezent cu 50 unqtl Opti-mem. Lipofectamina 2000 diluată și siRNA au fost ulterior amestecate și incubate pentru încă 20 de minute la temperatura camerei pentru formarea complexă.Ulterior, complexul a fost incubat cu DCs într-o placă de 24 de sonde la 37 de centi C într-un CO2 umidificat 5% în atmosferă de aer timp de 6 ore. când s-a efectuat cotransfecția, în fiecare godeu s-au adăugat cantități echivalente de cmd80 siARN:Lipofectamină 2000 și cd86 siARN:lipofectamină 2000complexe. FAM-scrambled-siRNA a fost folosit cacontrolul negativ pentru a determina eficiența transfecției. Au fost stabilite trei grupuri de DCs transfectate: în grupul non-siARN, s-a adăugat doar Lipofectamina 2000, fără a se adăuga anysiRNA la DCs. În grupul siRNA, MDC – urile au fostotransfectate de siRNA specifice CD80 și CD86. În grupul Irna negativ, MDC-urile au fost transfectate de famam-siARN nespecific, care nu are nicio omologie cu ARN-urile vizate.Experimentele au fost efectuate în trei exemplare pentru fiecare probă.Eficiența transfecției a fost determinată utilizând fluorescențamicroscopie (Nikon Eclipse Ti, Nikon Corporation) și detectată prin citometrie byflow.

transcriere inversă-cantitativăreacția în lanț a polimerazei (RT-qPCR)

pentru a evalua nivelurile de expresie a ARNm CD80 și CD86 în urma transfecției, RT-qPCR a fost efectuat. Secvențele de primer (tabelul II) au fost proiectate în conformitate cu GenBank și sintetizate de DaAn Gene Co., Ltd. Din Sun Yat-Senuniversitatea (Guangzhou, China). La 24 de ore post-transfecție, a fost extras totalRNA de 1 ct 106 DCs cu ajutorul reactivului TRIzol (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.) și invers transcrise andamplified folosind QuantiTect SYBR Green RT-PCR kit (Qiagen GmbH,Hilden, Germania) într-un Roche LightCycler 480 (Roche Diagnostics,Basel, Elveția). Amplificările au fost efectuate în conformitate cu protocolul producătorului pentru QuantiTect SYBR Green RT-PCRkit (Takala, Japonia). Condițiile de amplificare au fost de 40 de cicluri de 93 XTC pentru 3 min, 93 XTC pentru 30 sec, 55 XTC pentru 45 sec și 72 XTC pentru 45 sec. fiecare probă a fost administrată în fiecare din cele trei sonde. Relativegene expression levels were calculated using the quantificationcycle (Cq) method with normalization to glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase (GAPDH) as the reference gene using 2−∆∆Cq(13).

citometrie în flux

pentru a detecta ratele de Expresie pozitive ale CD80 și cd86 pe DCs în urma transfecției, citometria în flux a fost efectuată pe poarta MHC II / CD11c pentru CD80 și CD86. La șase ore după transfecție, DC-urile au fost spălate de două ori cu PBS și incubate cu anticorpi marcați fluorescent la 4 CTC timp de 30 min.Ulterior, celulele au fost spălate din nou cu PBS și fixate CU10 g/l paraformaldehidă. Au fost utilizați următorii anticorpi monoclonali anti-șoarece: PE-anti-MHC II, FITC-Anti-CD11c, PE-anti-CD80 și FITC-anti-CD86, după cum sa menționat mai sus. Toate analizele flowcytometrice au fost efectuate utilizând controale izotipice IgG.

separarea celulelor T

splinele au fost îndepărtate după ce șoarecii au fost neutralizați prin luxație cervicală. Celulele T au fost separate folosindmediu de separare a limfocitelor din mouse conform producătorului protocol (Dakewe Biotech Co., Ltd., China). Densitatea celulară a fostajustată la 1 Olt 109 / l înainte de prelucrarea ulterioară.

reacție limfocitară mixtă (MLR)

DCs derivată din măduva osoasă murină astmatică(1 Oct 104/sondă) și celulele T sănătoase (1 Oct 105 / sondă) au fost co-cultivate în plăci de 96 godeuri la un raport de 1:10. Sistemele de co-cultură au fost împărțite în trei grupe: i) grupul non-siARN, ii) Grupul siARN, șiiii) grupul negativ de siARN, cu DCs din grupurile corespunzătoare, așa cum este descris mai sus. Apoi, s-au adăugat ovule în fiecare godeu la o concentrație afinală de 10 mg/l într-un volum total de 200 ecqutl. Celulele au fost incubate la 37 CTC într-un 5% CO2 umidificat în atmosferă de aer timp de 72 ore.

teste Imunosorbente enzimatice(ELISAs)

după 3 zile de co-cultură, supernatantul a fost colectat. Nivelele IFN-XV și IL-4 au fost analizate utilizând kit-uri ELISA specifice pentru IFN-XV și IL-4 (Dakewe Biotech Co., Ltd.) conform instrucțiunilor producătorului. Valorile absorbanței au fost citite la 450nm folosind un MK3 Multiskan (Thermo Fisher Scientific, Inc.).

analiza statistică

analizele statistice au fost efectuate cu SPSSsoftware, versiunea 13.0 (SPSS, Inc., Chicago, IL, SUA). Datele sunt prezentate ca deviația standard medie (DS) a valorilor de la sută la sută. Examinările au fostefectuate în trei exemplare pentru fiecare șoarece. Comparațiile statistice între grupuri au fost efectuate utilizând o analiză unidirecțională a varianței,iar comparațiile în cadrul unui grup au fost efectuate utilizând testul studentului. Diferențele dintre grupuri au fost considerate statisticsemnificativ atunci când P <0,05.

rezultate

model astmatic

cei 20 de șoareci sănătoși balb / C de grad SPF au fost repartizați grupurilor de control astmatice și normale, cu câte 10 șoareci în fiecare. Allmice au fost evaluate în analiza finală fără pierderi experimentale de animale. Conform patologiei țesutului pulmonar, secțiunile pulmonarede la șoarecii imunizați cu ovule au prezentat inflamație clară a căilor respiratorii cu infiltrate perivasculare și perivasculare. Aceste infiltrateconstau în principal din eozinofile și limfocite, iar secțiunile au prezentat mucoasa bronșică și îngroșarea mușchilor netezi,secreția crescută de mucus, vărsarea celulelor epiteliale ale căilor respiratorii, stenoza căilor respiratorii și celulele inflamatorii împrăștiate în interstitiul pulmonar. Nu s-au observat modificări patologice semnificativesecțiuni pulmonare din grupul de control normal. Reprezentantdatele histopatologice sunt prezentate în Fig.1.

expresia moleculei de suprafață celulară de CDC

nivelurile de Expresie ale CD11c, CD80 și CD86 pe suprafețele CDC au fost detectate prin sortare celulară activată prin fluorescență(FACS). MDC-urile din grupul astmatic au exprimat CD11c la un nivel comparabil cu cel din grupul de control normal; nu a fost găsită nicio diferență semnificativă între cele două grupuri (P>0,05). Cu toate acestea, în comparație cu grupul de control normal, grupul astmatic a prezentat niveluri de Expresie CD80 și CD86 semnificativ mai mari(P<0,05; Fig. 2).

transfecția mDCs

construcțiile specifice siRNA CD80 și CD86 au fost transferate cu succes în MDC. MDC-urile transfectate au fost observate la microscopul fluorescent la 6 ore după transfecție.Eficiența de transfecție a siARN detectată de FACS a fost de ~75% (Fig. 3).

ARNm și expresia proteică a Cd80 și CD86 de către MDC după transfecție

nivelurile de ARNm și expresie proteică ale CD80 și cd86 în MDC transfectate au fost detectate prin RT-qPCR și FACSanalysis la 24 și respectiv 72 de ore după transfecție. La CD80and CD86 arnm expresie nivelurile detectate prin RT-qPCR indicat thatCD80 arnm nivelul de exprimare în non-siRNA, siRNA si negativesiRNA grupuri au fost de 2,09±0.46, 0.60±0.17, și 2.04±0.93,respectiv, și CD86 arnm nivel de exprimare a fost 3.58±0.20,0.91±0.48, și 2.83±0.83, respectiv. Datele furnizate de FACSindicated că CD80 proteine pozitiv expresie rate în thenon-siRNA, siRNA și negative siRNA grupuri au fost 82.45±15.80,30.79±7.07 și 81.83±10.07%, respectiv, și CD86 proteinpositive expresie ratele au fost 89.45±10.22, 27.29±6.99, and87.66±11.74%, respectiv. Nivelul de exprimare a ARNm și ratele de Expresie proteinpositive au prezentat rezultate comparabile. Nu a existat o semnificație semnificativă între grupul non-siARN și grupul negativ de siARN (P>0,05). Expresia CD80 și CD86 la ARNm și nivelurile de proteine din grupul siARN a scăzut semnificativîn comparație cu cea din grupurile non-siARN și negative(P<0,05; Fig. 4 și 5). Acest lucru demonstrează că interferența orientată către siARN poate suprima semnificativ ARNm CD80 și CD86 și nivelurile de expresie a proteinelor.

secreția de IFN-XV și IL-4 de către celulele T Co-cultivate cu MDC

după 72 de ore de co-cultură, nivelurile IFN-XV și IL-4 din supernatantul sistemului de co-cultură a celulelor T și MDC au fost detectate prin ELISA. Expresia IFN-XV a fost semnificativ crescută în grupul siARN (132,73 int 25,04 pg/ml), în comparație cu grupurile non-siARN și negative ale siARN (72,56 int 26,30 și respectiv 80,21 int 24,42 pg/ml; P<0,05), în timp ce nu au fost detectate diferențe semnificative între grupurile non-siARN și>0.05). Nivelurile de Expresie ale IL-4 au scăzut semnificativ în grupul siARN (93,04 int.23,13 pg/ml), în comparație cu grupurile non-siARN și negative ale siARN (150,69 int. 29,50 și respectiv 163,19 int. 25,36 pg/ml; P<0,05), în timp ce nu s-au detectat diferențe semnificative între p>0,05; fig. 6).

discuție

astmul bronșic este o boală cronică inflamatorie a căilor respiratorii care implică o varietate de celule inflamatorii, inclusiv mastocite, eozinofile, limfocite și alte componente celulare (14-17).Dezechilibrul Th1 / Th2 este un factor cheie care contribuie la severitatea astmului(18). APC, inclusiv DC, macrofage și celule B (19), joacă un rol crucial în stimularea celulelor T (3). Dintre acestea, DC este cel mai puternicapc, contribuind la răspunsurile imune primare și secundare,inclusiv imunitatea alergică. DCs Mature (MDC) cu niveluri ridicate de exprimare a moleculelor co-stimulatoare CD80 și CD86 pot activa celulele T, în timp ce celulele dendritice imature (IDC) cu un nivel scăzut de exprimare a CD80 și CD86 suprimă răspunsul celulelor T și induc toleranța imună (20,21). Pacienții cu dcsin cu astm bronșic s-au dovedit a fi hiperactivi(22).

CD80 și CD86 sunt două tipuri de proteine care sunt exprimate pe suprafața APC și care funcționează în tandem pentru a furniza semnale eco-stimulatoare necesare pentru activarea și supraviețuirea celulelor T. Studiile anterioare au arătat că nivelurile de Expresie ale moleculelor co-stimulatoare CD80 și CD86 de pe suprafața mDC sunt strâns asociate cu reacția celulelor Th2 și inflamația căilor respiratorii(23,24). La pacienții astmatici, MDC-urile care exprimă foarte mult CD80 și CD86 pot stimula activarea celulelor T helper CD4+pentru a se diferenția față de celulele Th2,rezultând un dezechilibru Th1/Th2. După aceea, secreția inadecvată a citokinelor Th1, cum ar fi IFN-XV, împreună cu secreția crescută a citokinelor Th2, cum ar fi IL-4 și IL-5, provoacă inflamația eozinofilă și inflamația alergică a căilor respiratorii(10,24,25). Douăsemnalele sunt necesare pentru promovarea activării celulelor Th2 (26-28). Primul semnal este formarea complexelor antigen-MHC pe suprafața mDC care se leagă în mod specific cu complexul receptor-receptor CD3 al celulelor T pe suprafețele celulelor T, iar al doilea semnal este expresia moleculei co-stimulatoare și activarea funcțională pe suprafețele mDC care se leagă în mod specific de receptori pe celulele T na-VIII; cele două semnale formează o cale co-stimulatoare (29). De asemenea, s-a sugerat că există un al treilea semnal (30), deoarece anumite molecule celulare produse de DCs, cum ar fi limfopoietina stromală Timică (TSLP), afectează direcția diferențierii celulelor Th. Cu toate acestea, dintre toatesemnalele menționate anterior, calea co-stimulatoare CD80/CD86-CD28ESTE cea mai clasică și importantă. Cercetările anterioare au indicat că calea co-stimulatoare CD80/CD86-CD28 poate fi un obiectiv eficient pentru tratamentul astmului, demonstrând că blocarea căii co-stimulatoare cd80/CD86 prin abordări de anticorpi monoclonali poate inhiba inflamația la șoarecii astmatici (25). În plus, suprimarea căii Cd80 / CD86co-stimulatoare folosind oligonucleotide antisens poate suprima hiperactivitatea căilor respiratorii (31).

ARNr este un fenomen de reducere a zgomotului genic în care ARN-urile dublu catenare specifice sau exogene declanșează degradarea ARNm omolog și induc pierderea fenotipurilor funcționale corespunzătoare. De când tehnica a fost descoperită pentru prima dată în 1998 de Fire et al (32), tehnica a suferit o dezvoltare ulterioară pentru a atinge un grad ridicat de specificitate și eficiență. Aplicarea terapeutică a Arntehnologia este un subiect care a atras niveluri ridicate deinteres pentru cercetarea medicală și clinică de bază în ultimii ani.Capacitatea RNAi de a inhiba expresia genică virulentă a fostutilizate pe scară largă pentru a trata o varietate de boli (33-35).De asemenea, o serie de studii au raportat că RNAi poate fi utilizat inDCs pentru diagnosticarea și tratarea astmului bronșic (36-39).Darcan-Nicolaisen și colab (40) au descoperit că cele două semne majore ale astmului alergic în modelul de șoarece de astm indus de astm, care sunt inflamația căilor respiratorii și hiperactivitatea, au fost ameliorate semnificativ prin traductorul de semnal și activatorul transcripției 6 (STAT6) tăcere în celulele epiteliale ale căilor respiratorii utilizând administrarea picăturilor nazale siRNA.Moriwaki și colab (41) au demonstrat că supresorul mediat de siRNA al semnalizării citokinelor 3(SOCS3) tăcerea genei ar putea suprima reactivitatea căilor respiratorii și infiltrarea eozinofilă care a fost indusă de stimularea alergenică la șoarecii astmatici. Zheng și colab (42) au constatat că aplicarea siRNA a fost capabilă să inhibe expresia genei tirozin protein kinazei (TPK) în DCs a șoarecilor astmatici, reprimând capacitatea funcțională a DCS ca celule prezentatoare de antigen, inhibând astfel activarea și diferențierea celulelor T. Cu toate acestea, lipsesc studiile privind efectele cd80 și cd86 mediate de siRNA în DCs asupra diferențierii celulelor T la șoarecii astmatici. În studiul de față, ARNm-ul CD80 și CD86 și expresia proteinelor în DCs derivată de os murin au fost reduse cu succes cu direcționarea CD80 – andCD86 siRNA, care a verificat eficiența ARNr.

în studiul de față, a fost utilizat un model de șoarece astmatic care a fost stabilit conform metodelor raportate anterior(43). Rezultatele au indicat că MDC obținute din grupul astmatic au prezentat niveluri crescute de Expresie Cd80 și CD86, ceea ce implică faptul că capacitatea CD80/Cd86 poate fi sporită la pacienții astmatici. Ca urmare a transformării MDC – urilor cu siARN vizate de CD80 și CD86, nivelurile de Expresie ARNm și ratele de Expresie proteice pozitive ale cdd80 și CD86 au scăzut semnificativ, confirmând efectul inhibitor pe care abordarea siARN l-a avut asupra moleculelor co-stimulatoare CD80 și CD86 la nivel transcripțional și translațional. În supernatantul din co-cultura MDC – urilor și a celulelor T,RNAi a indus o creștere a expresiei IFN-XV și o reducere a nivelurilor ofIL-4, indicând faptul că scăderea expresiei moleculelor eco-stimulatoare CD80 și CD86 în MDC a slăbit calea co-stimulatoare cd80/CD86-CD28 la șoarecii astmatici. RNAi a afectat, de asemenea, expresia citokinelor Th1/Th2, indicând faptul că dezechilibrul Th1/Th2 original a fost modificat și, în consecință, a fost indusă imunetoleranța. Aceste constatări indică faptul că CD80 și Cd86 pot fi ținte potențiale pentru aplicarea RNAi în tratamentul astmului și oferă o nouă cale pentru terapia genică a astmului.

mulțumiri

Acest studiu a fost susținut de un proiect deschis grants from the State Key Laboratory of Respiratory Disease (Guangzhou,China) (grant no. 2007da80154f1107).

	Locksley RM: astm și inflamație alergică. Celula. 140:777–783. 2010. Vizualizare Articol: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Holgate ST: Imuneresponses înnăscute și adaptive în astm. Nat Med. 18:673–683. 2012. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	zada M, Robinson DS și Kay AB: rolul limfocitelor T în patogeneza astmului. J Alergie ClinImmunol. 111:450–464. 2003. Vizualizare Articol: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Lambrecht BN și Hammad H: rolul celulelor dendritice și epiteliale ca regulatori principali ai inflamației căilor respiratorii alergice. Lancet. 376:835–843. 2010. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Holt PG și Upham JW: rolul celulelor dendritice în astm. Curr Opin Alergie Clin Immunol. 4:39–44.2004. Vizualizare Articol: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Lim TS, Goh JK, Mortellaro A, lim CT,H Inksktmmerling GJ și Ricciardi-Castagnoli P: CD80 și Cd86reglează diferențiat interacțiunile mecanice ale celulelor T cu prezentarea de antigen celulele dendritice și celulele B. PLoS Unu.7:. Vezi articol: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Wong CK, Lun SW, Ko FW, Ip WK, Hui DS andLam CW: Expresie crescută a plasmei și a suprafeței celularemolecule eco-stimulatoare CTLA-4, CD28 și CD86 la pacienții adulțicu astm alergic. Clin Exp Immunol. 141:122–129. 2005.Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Shi HZ, Xie ZF, Deng JM, Chen Yq și XiaoCQ: proteină CD86 solubilă în probele serice ale pacienților cu astm.Torace. 59:870–875. 2004. Vezi articol: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Van Rijt LS și Lambrecht BN: Dendriticcelule în astm: o funcție dincolo de sensibilizare. Clin Exp Alergie.35:1125–34. 2005. Vezi articol : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Van Rijt LS, vos n, Willart M, Kleinjan A,Coyle AJ, Hoogsteden HC și Lambrecht BN: rolul esențial aldendritice celule CD80/CD86 costimulare în inducerea, dar nu reactivarea, a răspunsurilor efectoare th2 într-un model de șoarece de astm.J Alergie Clin Immunol. 114:166–173. 2004. Vizualizare Articol: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Wu SG, Wang GL, Li LY și Ji J: efectele microRNA-21 asupra transductorului de semnal interleukin 12 / și activatorului căii de semnalizare a transcripției 4 la șoarecii astmatici. Cent EUR JImmunol. 39:40–45. 2014. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Gu X, Xiang J, Yao Y și Chen Z: Effectsof interferență ARN pe CD80 și CD86 expresie în celulele dendritice murine derivate din osemarrow. Scand J Immunol. 64:588–594.2006. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Livak KJ și Schmittgen TD: analiza datelor de expresie a genelor relative folosind PCR cantitativ în timp real șimetoda ct 2-inkt. Metode. 25:402–408. 2001. Vezi articol: Google Scholar: PubMed / NCBI
	fanta CH: astm. N Engl J Med.360:1002–1014. 2009. Vizualizare Articol: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Lambrecht bn și Hammad H: celule dendritice pulmonare în infecția virală respiratorie și astm: de la protecție laimunopatologie. Anu Rev Immunol. 30:243–270. 2012. Vezi articol: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Wenzel SE: fenotipuri astm: Theevolution de la clinice la abordări moleculare. Nat Med.18:716–725. 2012. Vizualizarearticol: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Hansel TT, Johnston SL și Openshaw PJ:microbi și răspunsuri imune ale mucoasei în astm. Lancet.381:861–873. 2013. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Compalati e, Braido F și Canonica GW: Anupdate privind imunoterapia alergen și astm. Curr Opin Pulm Med.20:109–117. 2014. Vizualizare Articol: Google Scholar : PubMed/NCBI
		Goyvaerts c, Dingemans J, de Groeve K,Heirman C, Van Gulck e, Vanham G, de Baetselier P, Thielemans K,Raes G și Breckpot K: țintirea prezenței antigenului uman seturi de celule. J Virol. 87:11304–11308. 2013. Vezi articol: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Reise Sousa C: celulele dendritice într-un matureag. Nat Rev Immunol. 6:476–483. 2006. Vizualizarearticol: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Gill MA: rolul celulelor dendritice înastm. J Alergie Clin Immunol. 129:889–901. 2012. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Shi JH, LI YG și LI TS: rolurile celulelor dendritice în prezentarea antigenului și patogeneza astmului. Zhonghua Jie He He Hu Xi Za Zhi. 28:22–27. 2005.(InChinese). PubMed/NCBI
	Wong CK, Lun SW, Ko FW, Ip WK, Hui DS andLam CW: Expresie crescută a moleculelor plasmatice și celulare stimulatoare CTLA-4, CD28 și CD86 la pacienții adulți cu astm alergic. Clin Exp Immunol. 141:122–129. 2005.Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Bellou a și Finn PW: Costimulare:căi critice în reglarea imunologică a astmului. Astmul CurrAllergy Rep.5:149-154. 2005. Vezi Articolul : Google Scholar: PubMed/NCBI
	Chen Yq și shi HZ: CD28/CTLA-4-CD80/Cd86și ICOS-b7rp-1 cale costimulator în astm bronșic. Alergie.61:15–26. 2006. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Bieber t, Novak n, Herrmann N și Koch S:rolul celulelor dendritice în dermatita atopică: o actualizare. Clin RevAllergy Immunol. 41:254–258. 2011. Vizualizare Articol: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Hespel C și Moser M: rolul celulelor inflamatorii dendritice în imunitatea înnăscută și adaptivă. Eur J Immunol.42:2535–2543. 2012. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Novak n: o actualizare cu privire la rolul celulelor umane la pacientii cu dermatita atopica. J Alergie ClinImmunol. 129:879–886. 2012. Vizualizare Articol: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Lombardi V, Singh AK și Akbari O: Therole de molecule costimulatoare în boli alergice și astm. IntArch Alergie Immunol. 151:179–189. 2010. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Zhang Y, Zhou X și Zhou B: DC-derivedTSLP promovează polarizarea Th2 în LPS-amorsat airwayinflammation alergice. Eur J Immunol. 42:1735–1743. 2012. Vizualizare Articol: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Crosby JR, Guha M, Tung D, Miller DA,Bender B, Condon TP, York-DeFalco C, Geary RS, Monia BP, Karras JGand Gregory sa: oligonucleotidă antisens Cd86 inhalată inhiba inflamatia pulmonara si hiper-reactia cailor respiratorii in cazul infectiilor alergice. J Pharmacol Exp Ther. 321:938–946. 2007. Vezi articol: Google Scholar: PubMed / NCBI
	foc A, Xu S, Montgomery MK, Kostas SA,Driver SE și Mello CC: Interferență genetică puternică și specifică prin ARN dublu catenar în Caenorhabditis elegans. Natura.391:806–811. 1998. ViewArticle: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Ghafouri-Fard S: siRNA și cancerimmunotherapy. Imunoterapie. 4:907–917. 2012. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Gavrilov K și Saltzman WM: Terapeuticsirna: principii, provocări și strategii. Yale J Biol Med.85:187–200. 2012.PubMed/NCBI
	Yan WJ, Xu SJ, Xie MM și Wu BL: efecte ale guanosinemonofosfatului dimeric ciclic exogen asupra expresiei genei Streptococcus mutans. Jiu-Jiu-Jiu-Jiu. 16:1451–1454. 2012.(În Chineză).
	Lee CC, Huang HY și Chiang BL:interleukina-4 mediată Lentiviral și interleukina-13 Rnainterferența scade inflamația căilor respiratorii și hiperreactivitatea.Hum Gene Ther. 22:577–686. 2011. Vezi Articolul : Google Scholar: PubMed/NCBI
	Li y, Sun M, Cheng H, Li S, Liu L, Qiao H,Hua S și Lu J: Silencing il-23 expresie de un ac de păr mic Rnaproteaza impotriva astmului la soareci. Exp Mol Med. 43:197–204. 2011.Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Woska JJ și Gillespie ME:identificarea și reglarea mediată de ARN cu interferență mică a complexului de cursă care mediază degranularea celulelor mastocite RBL-2h3.Scand J Immunol. 73:8–17. 2011. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Lu XX, McCoy KS, Xu JL, Hu WK și Chen HB:mici interferente ARN direcționarea în funcție de celule T IG mucin-3 scadeinflamația căilor respiratorii alergice și hiperreactivitate. Inflamație.36:582–591. 2013. Vezi articolul : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Darcan-Nicolaisen Y, Meinicke H, Fels G,Hegend O, Haberland A, K Unktihl A, Loddenkemper C, Witzenrath M, KubeS, Henke W și hamelman e: ARN interferent mic împotrivafactorul de transcriere STAT6 inhibă inflamația alergică a căilor respiratorii și hiperreactivitatea la șoareci. J Immunol. 182:7501–7508. 2009.Vezi articolul : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Moriwaki a, Inoue H, Nakano T, MatsunagaY, Matsuno Y, Matsumoto T, Fukuyama S, Kan-O K, Matsumoto K,Tsuda-Eguchi m, și colab.: tratamentul cu celule T cu interferență mică rnafor supresor al semnalizării citokinelor 3 modulează reacțiile respiratorii alergice într-un model murin de astm. Am J Respir Cell Mol Biol.44:448–455. 2011. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Zheng YH, Lu JJ, Guo ZL, Ren T și LiangYJ: ARN-uri mici de interferență specifice pentru splină tirozină kinaseinhibit maturarea celulelor dendritice ale șoarecilor astmatici in vitro.Zhongguo Hu Xi Yu Wei Zhong Jian Hu Za Zhi. 8:487–491. 2009.(InChinese).
	Li JG, Zhuansun YX, Ran PX, Zhang W, MoXN, Wu H și Li YQ: Efectele celulelor stem mezenchimale ale măduvei osoasepe CD4 + CD25 + celule T reglatoare și inflamația căilor respiratorii la șoarecii astmatici. Zhongguo Zu Zhi Gong Cheng Yan Jiu.12:9302–9305. 2008.(În Chineză).