rezistența inductibilă la clindamicină în stafilococi poate fi detectată prin metoda de difuzie a discului folosind discuri de clindamicină și eritromicină. Testul D se efectuează prin difuzie pe disc, plasând un disc de eritromicină de 15-hectog în apropierea unui disc de clindamicină de 2-hectog pe o placă de agar care a fost inoculată cu un izolat stafilococ; placa este apoi incubată peste noapte.
o aplatizare a zonei de inhibiție în jurul discului clindamicinei proximal față de discul de eritromicină (care produce o zonă de inhibare în formă de litera D) este considerat un rezultat pozitiv și indică faptul că eritromicina a indus rezistența la clindamicină (un „test de zonă d”pozitiv). Pentru izolatele rezistente la eritromicină, testele de inducție pot ajuta laboratoarele să determine dacă rezultatele pentru clindamicină trebuie raportate ca fiind sensibile (când testul de inducție este negativ) sau ca rezistente (când testul de inducție este pozitiv).
mecanismul de acțiune al eritromicinei și clindamicinei și dezvoltarea rezistenței
eritromicina (o macrolidă) și clindamicina (o lincosamidă) reprezintă două clase distincte de agenți antimicrobieni care inhibă sinteza proteinelor prin legarea la subunitățile ribozomale 50S ale celulelor bacteriene. În stafilococi, rezistența la ambii agenți antimicrobieni poate apărea prin metilarea locului țintă ribozomal. O astfel de rezistență este de obicei mediată de genele erm.
semnificația clinică a rezistenței inductibile la clindamicină:
rezistența la macrolidă-lincosamidă-streptogramină B (MLSB), care este mediată de mecanismul de modificare a părții țintă, are ca rezultat rezistența la eritromicină, clindamicină și streptogramină B. Acest mecanism poate fi
- constitutiv, unde metilaza ARNr este întotdeauna produsă,
dacă se efectuează testarea in vitro Staphylococcus aureus izolatele cu rezistență constitutivă sunt rezistente la eritromicină și clindamicină. - sau poate fi inductibil, unde metilaza este produsă numai în prezența unui agent inductor (notă: Eritromicina este un inductor eficient al rezistenței la macrolidă-lincosamidă-streptogramină B (MLSB)). Izolatele cu rezistență inductibilă sunt rezistente la eritromicină, dar par sensibile la clindamicină în testele de rutină invitro.
semnificația clinică a testului inductibil de rezistență la clindamicină (testul D)
clindamicina este un agent atractiv pentru terapia empirică pentru infecțiile suspectate cu S. aureus datorită proprietăților sale farmacocinetice și farmacodinamice excelente. Eșecurile clinice ale terapiei cu clindamicină pentru tratamentul infecțiilor cu MRSA au fost documentate pentru tulpini sensibile la clindamicină, dar rezistente la eritromicină. Eșecurile s-au datorat rezistenței inductibile la clindamicină.
în astfel de cazuri, in vivo, terapia cu clindamicină poate selecta pentru mutanții erm constituenți, ceea ce poate duce la insuficiență clinică. Rezistența la clindamicină poate fi constitutivă sau inductibilă. Testele de susceptibilitate la antibiotice de rutină nu pot identifica aceste tulpini. Testul d (rezistență inductibilă la clindamicină) este utilizat pentru a detecta rezistența inductibilă la clindamicină.
procedura pentru testul inductibil de rezistență la clindamicină (D):
- pregătiți 0.5 McFarland suspensie standard de eritromicină rezistente Staphylococcus aureus izolate
- face o cultură gazon de bacterii în Muller Hinton agar (MHA) plăci.
- puneți discurile de clindamicină (2-hectog ) și eritromicină (15-hectog ) la o distanță de aproximativ 15 mm (măsurată de la margine la margine).
- incubați placa timp de 16 până la 18 ore la 37oC
interpretarea rezultatului testului D
o zonă clară de inhibare în formă de D în jurul discului clindamicinei este desemnată ca fenotip D care este etichetat ca D sau d+. Alte patru fenotipuri non-inducție (desemnate ca fiind negative, zona d tulbure, rezistente și sensibile ) sunt, de asemenea, observate în rezultatele difuziei discului