introduktion
Co-immunoprecipitation, Co-IP kort sagt, är en allmänt tillämpad teknik för att identifiera fysiologiskt relevanta protein-proteininteraktioner genom att använda målproteinspecifika antikroppar för att indirekt fånga proteiner som är bundna till detta specifika målprotein. Som en förlängning av IP kan Co-IP fånga och rena inte bara det primära målet utan också andra makromolekyler som binder till målet genom infödda interaktioner. Skillnaden mellan IP och co-IP är fokus för experimentet. IP är inriktad på det primära målet, vilket binder antikroppen. Medan Co-IP riktar sig mot de sekundära målen, som interagerar med de primära proteinerna, istället för antikropp. Efter immunutfällning tvättas proteiner som fångas på pärlorna och elueras för att få renade primära och sekundära målproteiner. Dessa målproteiner kan karakteriseras i olika metoder, såsom WesternBlot och mass spec analys enligt Hagelgevär strategi, för att identifiera partner protein-ID, bindande affiniteter, kinetik för bindning och oupptäckta funktioner hos det primära proteinet.
kritiska faktorer Om Co-IP:
som en kraftfull teknik används Co-IP regelbundet av biokemister för att utforska protein-proteininteraktioner. Medan Co-IP-metodiken är enkel, är det inte lätt att identifiera fysiologiska protein-proteininteraktioner genom Co-IP-reaktion på grund av interaktionens instabilitet, icke-specifik bindning till IP-reagens och antikroppskontaminering. Alla ovanstående problem kan ha negativa effekter på detektering av protein-proteininteraktioner.
Co-IP av proteinkomplex
eftersom Co-IP beror på protein-proteininteraktioner för att detektera de bundna proteinerna är bindningsaffiniteten och stabiliteten hos de fysiologiska interaktionerna under hela Co-IP-processen mycket viktig. Otillräcklig bindningstid och omfattande tvättsteg kan minska bindningseffektiviteten och orsaka fel på detektering av proteininteraktion. Därför, för proteiner, som förutses ha vecka bindande affinitet eller dynamiska interaktioner, förväg stabilisering av protein-protein interaktioner är nödvändiga, till exempel, tvärbindningsprocesser kan utföras före Co-IP.
ospecifika interaktioner
brott av cellmembran och organeller orsakar frisättning av stora mängder proteiner, som separeras av gränsen, för att komma i kontakt. Därför är det oundvikligt att ospecifika interaktioner, med andra ord falska positiva interaktioner, kan inträffa, vilket stör dataanalysen. Detta är särskilt vanligt för proteiner som har utfällda eller flexibla regioner, som är relativt klibbiga och ospecifikt binder andra proteiner. Sätt att återuppleva sådana problem kan vara preclearance av lysat med användning av primära antikroppar för att avlägsna ospecifika proteiner och ändra buffertens jonstyrka för att minska den ospecifika bindningen.
Creative Proteomics kan ge Anpassad experimentell design och förfina Co-IP-parametrar baserat på kundernas behov. Vi lovar tillförlitlig Co-IP-analys av protein-protein interaktioner med våra erfarna forskare och tekniker.
funktioner i Co-IP-tjänst:
- studera interaktionerna mellan proteiner och proteinkomplex
- övervaka dynamiken i proteininteraktion
- studie protein-protein interaktion i ett icke-denaturerande tillstånd, vilket är nästan fysiologiskt
- kartläggning av de interagerande domänerna av proteiner
vår Co-IP-tjänst innehåller:
- Experiment design baserat på dina specifika projektbehov: buffertar, pärlor, antikroppar, osv.
- parametrar optimering, såsom bindningstid
- cell lysis, IP, tvätt & eluering
- WesternBlot/ masspektrometri, beroende på projektets behov
- dataanalys & rapport leverans
beställningsförfarande:
