David A Weitz's Lab

kvantifiering av cellutsöndrade molekyler, t.ex. cytokiner, är grundläggande för karakteriseringen av immunsvar. Cytokinupptagningsanalyser som använder konstruerade antikroppar för att förankra de utsöndrade molekylerna till de utsöndrande cellerna används ofta för att karakterisera immunsvar eftersom de tillåter både känslig identifiering och återhämtning av livskraftiga svarande celler. Men om cytokinerna diffunderar bort från de utsöndrande cellerna, kommer icke-utsöndrande celler också att identifieras som svarande celler. Här inkapslar vi immunceller i mikrofluidiska droppar och utför cytokinupptagningsanalyser i droppar för att begränsa diffusionen av de utsöndrade cytokinerna. Vi använder mikrofluidiska enheter för att snabbt inkapsla enstaka naturliga mördare NK-92 MI-celler och deras mål K562-celler i mikrofluidiska droppar. Vi utför INFÅNGNINGSANALYSER i droppar IFN-22 mi-celler och visar att nk-92 MI-celler känner igen målceller i droppar och aktiveras för att utsöndra IFN-2 mi-celler. Droppinkapsling förhindrar diffusion av utsöndrade produkter till angränsande celler och reducerar dramatiskt både falska positiva och falska negativa, i förhållande till analyser som utförs utan droppar. I ett prov som innehåller 1% sanna positiva minskar inkapslingen, från 94% till 2%, antalet sanna positiva celler som uppträder som negativa; i ett prov som innehåller 50% sanna positiva, minskas antalet icke-stimulerade celler som uppträder som positiva från 98% till 1%. Efter att celler har släppts från dropparna, utsöndras cytokin kvar på utsöndrande immunceller, vilket möjliggör FACS-isolering av populationer som är mycket berikade för aktiverade effektor immunceller. Droppinkapsling kan användas för att minska bakgrunden och förbättra detekteringen av varje encellig sekretionsanalys.

Lämna ett svar

Din e-postadress kommer inte publiceras.