beskrivning
Thermo Scientific Pierce Ellmans reagens (DTNB) reagerar med sulfhydrylgrupper för att ge en färgad produkt, vilket ger en tillförlitlig metod för att mäta reducerade cysteiner och andra fria sulfhydryler i lösning.Ellmans reagens (5,5′-dithio-bis -) används för att uppskatta sulfhydrylgrupper i ett prov genom att jämföra med en standardkurva för en sulfhydrylinnehållande förening såsom cystein. Alternativt kan sulfhydrylgrupper analyseras med användning av utrotningskoefficienten för TNB (14 150 m-1 cm-1 vid 412 nm). Ellmans reagens har använts för andra tillämpningar än sulfhydryluppskattning, såsom för bestämning av alkyltioler genom HPLC med användning av en pre-kolonn derivatisering förfarande och att studera tioler i det aktiva stället för flera enzymer.
Funktioner i Ellmans reagens:
• Sulfhydrylanalys-reagerar kvantitativt med fria (reducerade) sulfhydrylgrupper (—SH) för att ge detekterbar TNB—produkt
• kolorimetrisk detektionsfärgad produkt möjliggör spektrofotometrisk mätning i kyvetter eller mikroplattor (jacobmax = 412 nm; 14,150/m·cm)
• beprövad metod—väl karakteriserad Kemi ger kvantifiering av peptid-eller proteinsulfhydrylgrupper med hjälp av utrotningskoefficientberäkning eller i jämförelse med en cysteinstandard
Reagensegenskaper
• alternativa namn: DTNB, Ellmans reagens
• Kemiskt namn: 5,5′-dithio-bis-(2-nitrobensoesyra)
• reaktiv mot: sulfhydrylgrupper (—SH)
• Kemisk formel: c14h8n2o8s2
• CAS-nummer: 69-78-3
• molekylvikt: 396.35
• form: Gult kristallint pulver
dtnb reagerar med en fri sulfhydrylgrupp för att ge en blandad disulfid och 2-nitro-5-tiobensoesyra (TNB). Målet för DTNB i denna reaktion är konjugatbasen (R—S-) av en fri sulfhydrylgrupp. Därför är hastigheten för denna reaktion beroende av flera faktorer: (1) reaktionens pH, (2) PKA’ för sulfhydrylen och (3) steriska och elektrostatiska effekter. TNB är den färgade arten som produceras i denna reaktion och har en hög molär utrotningskoefficient i det synliga området. Den molära utrotningskoefficienten för TNB rapporterades ursprungligen av Ellman (1959) för att vara 13 600 m-1 cm-1 vid 412 nm och pH 8,0. Följaktligen har detta värde citerats ofta i litteraturen. Senare studier har dock visat att den molära utrotningskoefficienten reflekteras mer exakt med ett värde av 14 150 m-1 cm-1 vid 412 nm. Utrotningen av TNB påverkas inte av förändringar i pH mellan 7, 6 och 8, 6. Emellertid är utrotningen av TNB annorlunda i andra lösningsmedel.