Full paperStructure and function of the zona pellucida: identifiering och karakterisering av proteinerna i musens oocyt's zona pellucida excepilic

zona pellucida är en acellulär päls som omger plasmamembranet hos fullvuxna äggceller från däggdjur och som är en acellulär beläggning som omger plasmamembranet hos fullvuxna äggceller från däggdjur och som utför en mängd viktiga funktioner under oogenes, befruktning och preimplantationsutveckling. I denna undersökning har proteinerna från musens oocyts zona pellucida identifierats och karakteriserats genom att använda zonae pellucidae isolerade individuellt från fullvuxna oocyter med munopererade mikropipetter. Olika morfologiska och biokemiska kriterier användes för att bedöma renheten hos de isolerade zonae pellucidae och i de flesta fall befanns de vara praktiskt taget fria från kontaminering av andra oocytproteiner. Det bestämdes att varje zona pellucida innehåller 4.8 ng protein, vilket representerar 80% eller mer av torrvikten för zona pellucida och cirka 17% av oocytens totala protein. Elektroforetiska analyser av så få som fem isolerade zonae pellucidae behandlade med diazotiserad jodosulfanilsyra avslöjade närvaron av endast tre radiomärkta proteiner, betecknade ZP1, ZP2 och ZP3. Samma tre proteiner identifierades genom Coomassie – blåfärgning när ett stort antal isolerade zonae pellucidae (cirka 750) utsattes för SDS-polyakrylamidgelelektrofores. Dessa tre proteiner migrerar som breda band på SDS-polyakrylamidgeler, i överensstämmelse med att de är glykoproteiner, med uppenbara molekylvikter på 200 000 (ZP1), 120 000 (ZP2) och 83 000 (ZP3). Samma proteiner radiomärktes när intakta oocyter behandlades med diazotiserad jodosulfanilsyra, ett reagens som inte tränger igenom oocytens plasmamembran, eller när isolerade zonae pellucidae behandlades med 3h-märkt 1-dimetylaminonaftalen-5-sulfonylklorid. Resultat av aminosyraanalys och tvådimensionell elektrofores med hög upplösning av de enskilda proteinerna antyder att varje protein representerar en unik polypeptidkedja. Proteinerna ZP1, ZP2 och ZP3 representerar cirka 36, 47 respektive 17% av det totala proteinet i zona pellucida. I närvaro av reduktionsmedel som orsakar upplösning av zona pellucida omvandlas ZP1 till en art som migrerar med en uppenbar molekylvikt på 130 000, vilket tyder på att den existerar som en oligomer, stabiliserad av disulfidbindningar, i oreducerat tillstånd. Resultaten av dessa experiment diskuteras med avseende på egenskaperna hos zona pellucida före och efter befruktning och jämförs med resultat erhållna med användning av vitellinhöljen av ägg från icke-däggdjur djurarter.

Lämna ett svar

Din e-postadress kommer inte publiceras.