översikt: med denna metod kommer vi att skapa en ren och föroreningsfri spore fylld spruta. Sprutan fylls med uppvärmt och steriliserat vatten och får svalna. Sporerna överförs sedan från sporutskrift till sprutlösningen med ett rengjort och sanerat skottglas. Vid slutförandet av denna Tek du kommer att ha skapat en spore lösning spruta redo för användning i någon mikroskopi ansökan.
OBS: Dessa instruktioner är mest effektiva när de utförs i den mest sterila miljön som finns tillgänglig. Den föredragna metoden innebär att följa stegen nedan när du arbetar i en ren och steril handskfack eller framför en laminär flödeshuv. Om du inte vill bygga en handskfack eller inte har en, har följande steg utförts med framgång genom att arbeta på en noggrant rengjord och sanerad bänkskiva. Liberal användning av spraydesinfektionsmedel och utspädd blekmedelslösning rekommenderas för rengöring och sanering av arbetsområdet.
material som behövs:
tomma sterila sprutor
två liter (eller större) kokkärl
en flaska 91% isopropylalkohol
flera pappershanddukar
en tändare eller alkoholflamma
ett skottglas
sterilt sporutskrift
procedur Ett: att göra en steril spruta
1. Fyll din kokkärl halvvägs med kran eller destillerat vatten (använd destillerat vatten om ditt kranvatten innehåller högre nivåer av mineraler och kemikalier).
2. Koka vattnet i potten högt i minst tio minuter, detta bör vara tillräckligt för att sterilisera och rengöra vattnet från alla bakterier, virus och mögelsporer.
3. Ta din tomma spruta och fyll den med kokande vatten. Låt det sitta i två minuter med varmt vatten inuti. (Om din spruta var sterilitet förpackad, hoppa över steg 4 och 5).
4. Rensa det varma vattnet från sprutan i ett handfat, inte tillbaka i kastrullen.
5. Upprepa steg 3 och 4 två gånger. Vid andra gången lämna det varma vattnet i sprutan.
6. Placera sprutan på en sval dragfri plats, helst i en ren blixtlåspåse
7. Låt det svalna i flera timmar innan du fortsätter till procedur två.
förfarande två: Överföring av trycksporer i sprutan
1. Rengör först ditt arbetsområde. Detta kan innebära att torka ner alla arbetsytor med en utspädd blekmedelslösning och spruta området rikligt med ett desinfektionsmedel som Lysol.
2. Placera följande material i handskfacket eller på den rengjorda och sanerade arbetsytan: snapsglaset, dina kylda sprutor, flaskan med alkohol, en pappershandduk, ditt tryck (fortfarande i zip-lock baggie) och tändaren eller alkoholflamman.
3. Tvätta händerna med antibakteriell tvål innan du fortsätter vidare.
4. Vik upp pappershandduken i delar av 20-talet och blötlägg ett hörn av det med alkoholen.
5. Med alkohol indränkt handduk torka insidan av snapsglaset, i huvudsak sterilisera ytan du är på väg att använda i överföringen. Låt snapsglaset lufttorka, bör bara ta några sekunder.
6. Ta bort nålskyddet från din sterila spruta och flamma sterilisera nålen. Ta sedan din alkoholdränkta pappershandduk och torka av nålen för att ytterligare hjälpa till med steriliseringen. Försök att undvika att låta nålen vidröra någon annan yta om inte annat instrueras att göra det.
7.OBS: Det är viktigt vid denna tidpunkt att arbeta så snabbt som möjligt för att bekämpa risken att förorena mögel och bakterier som faller in i ditt arbetsområde och därmed förstöra din spruta.
8. Ta bort utskriften från dess förvaringsväska. Fäll ut det för att exponera sporerna. Lätt börja skrapa, med hjälp av sprutans nål, en del av utskriften i skottglaset. För ett medelstort tryck är det vanligtvis tillräckligt att skrapa bort en sektion som inte är större än 1/5 av det totala trycket.
9. Du kommer att ha en liten märkbar samling sporer i skottglaset. Torka nu inte mer än hälften av vattnet från sprutan i skottglaset, rör om sporerna lätt i lösningen.
10. Sug sporvattenlösningen i sprutan. Du kan behöva utvisa lite mer vatten i snapsglaset och suga igen för att hjälpa till att fånga alla sporerna i sprutan.
11. När du har spore-lösningen tillbaka i sprutan bör du märka att vattnet inuti har blivit något tonat och du kan se små kluster av sporer som flyter i lösningen. Det här är bra, du har slutfört processen.
12. Sterilisera nålen igen med den alkoholdränkta pappershandduken, byt ut nålskyddet och placera sprutan tillbaka i din rena zip-lock-väska.
13. Låt sprutan sitta i minst 12 timmar innan den används i mikroskopiapplikation eller ympning för ätbara sorter. Ju äldre utskriften används, desto mer” uttorkad ” blir sporerna. För korrekt mikroskopiobservation eller spiring måste sporerna tillåtas rehydrera.