inducerbar klindamycinresistens i stafylokocker kan detekteras genom diskdiffusionsmetod med användning av clindamycin och Erytromycinskivor. D-test utförs genom diskdiffusion och placerar en 15-occurg Erytromycinskiva i närheten av en 2-occurg Clindamycinskiva på en agarplatta som har inokulerats med ett stafylokockisolat; plattan inkuberas sedan över natten.
en utplattning av inhiberingszonen runt Klindamycinskivan proximal till erytromycinskiva (som producerar en inhiberingszon formad som bokstaven D) anses vara ett positivt resultat och indikerar att erytromycin har inducerat klindamycinresistens (ett positivt ”d-zontest”). För Erytromycinresistenta isolat kan induktionstester hjälpa laboratorier att avgöra om resultaten för Clindamycin ska rapporteras som mottagliga (när induktionstestet är negativt) eller som resistenta (när induktionstestet är positivt).
verkningsmekanism för erytromycin och klindamycin och utveckling av resistens
erytromycin (en makrolid) och klindamycin (en linkosamid) representerar två distinkta klasser av antimikrobiella medel som hämmar proteinsyntes genom bindning till 50s ribosomala subenheter av bakterieceller. I stafylokocker kan resistens mot båda dessa antimikrobiella medel ske genom metylering av deras ribosomala målplats. Sådan resistens förmedlas vanligtvis av erm-gener.
klinisk betydelse för inducerbar Klindamycinresistens:
makrolid-linkosamid-streptogramin B (MLSB) – resistens, som medieras av målsidans modifieringsmekanism, resulterar i resistens mot erytromycin, klindamycin och streptogramin B. Denna mekanism kan vara
- konstitutiv, där rRNA-metylas alltid produceras,
om in vitro-testning görs Staphylococcus aureus-isolat med konstitutiv resistens är resistenta mot erytromycin och Clindamycin. - eller kan vara inducerbar, där metylas endast produceras i närvaro av ett inducerande medel (Obs: erytromycin är en effektiv inducerare av makrolid-lincosamid-streptogramin B (MLSB) resistens). Isolat med inducerbar resistens är resistenta mot erytromycin men verkar mottagliga för klindamycin vid rutinmässig Invitro-testning.
klinisk betydelse för inducerbar Klindamycinresistensprovning (D-Test)
Clindamycin är ett attraktivt medel för empirisk terapi för misstänkta S. aureus-infektioner på grund av dess utmärkta farmakokinetiska och farmakodynamiska egenskaper. Kliniska misslyckanden med klindamycinbehandling för behandling av MRSA-infektioner har dokumenterats för stammar som var klindamycinkänsliga men erytromycinresistenta. Misslyckandena berodde på inducerbar resistens mot clindamycin.
i sådana fall, In vivo, kan behandling med Clindamycin välja för konstitutiva ERM-mutanter, vilket kan leda till kliniskt misslyckande. Klindamycinresistens kan vara konstitutiv eller inducerbar. Rutinmässiga antibiotikaresistensprov kan inte identifiera dessa stammar. D-testet (inducerbart klindamycinresistens) används för att detektera inducerbart klindamycinresistens.
förfarande för inducerbart Klindamycinresistenstest (D):
- Förbered 0.5 McFarland standard suspension av Erytromycinresistenta Staphylococcus aureus isolat
- gör en gräsmatta av bakterier i Muller Hinton Agar (MHA) plattor.
- sätt Clindamycin (2-occurg ) och erytromycin (15-occurg ) skivor ungefär 15 mm från varandra (uppmätt kant till kant).
- inkubera plattan i 16 till 18 timmar vid 37oC
tolkning av resultat av D-Test
en klar, D-formad inhiberingszon runt Klindamycinskivan betecknas som d-fenotypen som är märkt som D eller D+. Fyra andra icke-induktionsfenotyper (betecknade som negativa , dimmiga d-zoner , resistenta och mottagliga ) observeras också i diskdiffusionsresultat