세포 라인을
인간 유방암 MCF-7,MDA-MB-231,BT474,BT549,SKBR3 세포 라인,U251glioblastoma,및 대장암 HCT116 세포 라인에서 구입 한 ATCC. 또한,이 세포들은 세포 내 세포 및 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 내 세포 맥코이의 5 배지에서 10%의 세포들을 유지하였다. 세포주들은 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 세포주들의 마우스 트리플 음성 유방암 세포 10%와 배지에서 유지 했다. 10%,15 밀리미터 헤페스,4.5 그램/엘 글루코오스 및 2-머캅토에탄올로 보충된 배지에서 0.05 밀리미터의 최종 농도로 배양하였다.7 개의 세포를 배양하여 10%의 배양액으로 배양하였다. 모든 세포주는 마이코 센서 분석 키트(애질런트 테크놀로지,카탈로그#302108)로 음성 마이코 플라스마 오염을 테스트했습니다.또한,본 발명의 실시예에 따르면,본 발명의 실시예에 따르면,상기 실시예에 따르면,상기 실시예에 따라,상기 실시예에 따라,상기 실시예에 따라,상기 실시예에 따라,상기 실시예에 따라,상기 실시예에 따라,상기 실시예에 따라,상기 실시예에 따라,상기 실시예에 따라,상기 실시예에 따라,상기 실시예에 따라,상기 실시예에 따라,상기 실시예에 따라,상기 실시예에 따라,상기 실시예에 따라,상기 실시예에 따라,상기 실시예에 따라,상기 실시예에 따라,상기 실시예에 따라,상기 실시예에 따라, 의 삭제 상 NF-kB 바인딩 사이트(TGGAAGCT-764-757)사용하여 수행되었는 빠른 돌연변이트 키트(Stratagene,La Jolla,CA). 사용 된 프라이머 시퀀스: 5 ′-GTGGTCGGGTACCTGCCCGCTCGCCCCTCGCGGGCTCTGCG-3′ (sense) and 5 ′-CGCAGAGCCCGCGAGGGGCGAGCGGGCAGGTACCCGACCAC-3′ (antisense).
pGL2-NF-κB-luc plasmid was constructed with the 3 NF-κB-binding sites: GTGGGTTCCC, TCGCCACTCCCC, and TGGAAAGTCCCC by blunt-end ligation. IMD-0354 (Catalog # I3159) and TNF-α (Catalog # T0157) were purchased from Sigma. The lentiCRISPR v2 vector was purchased from the Addgene plasmid repository (Catalog # 52961). Herceptin was obtained from the UC Davis Comprehensive Cancer Center Pharmacy as left-over medicine (Genentech, NDC 50242-132-01). 이 제품은 1998 년에 출시되었습니다. Anti-CD47(B6H12)용 항체 IHC,ICC,그리고 웨스턴 오 점에서 구입 한 산타 크루즈(카탈로그#sc-12730). 유동 세포 계측을위한 안티-피트는 비디 바이오 사이언스(카탈로그#556045)에서 구입했습니다. Anti-인 CD47(B6H12)항체를 위해 식세포 분석 결과에서 추출된 B6H12.2 하이브리도(ATCC®HB-9771™). 생체내 종양 억제를 위한 항 마우스 47 항체를 윌리엄 프레이저 박사(워싱턴 대학교 의과대학)에 의해 제공된 하이브리도마로부터 추출하였다. Anti-CD11b 용 항체 IHC 염색되었에서 구입 한 Invitrogen(카탈로그#MA5-17857). 마우스 모노클론 항-웨스턴 블롯-튜 불린 항체는 시그마-알드리치(카탈로그#6074)로부터 구입 하였다. 마우스 모노클론 항-웨스턴 블롯에 대한 액틴 항체는 시그마-알드리치(카탈로그#5441)로부터 구매되었다. 세포 신호 기술(카탈로그#2165)에서 구입 하였다. 유동 세포 계측 분석을위한 항체 항체는 비디 바이오 사이언스(카탈로그#340554)에서 구입했습니다.세포 또는 종양 조직으로부터의 단백질은 프로테아제 및 포스파타제 억제제 칵테일(세포 신호 전달)으로 보충 된 리파 용해 완충액(피어스)에서 추출되었다. 단백질 농도는 피어스 분석(피어스)을 사용하여 결정되었다. 그 후,용해물을 변성시키고,30 개의 단백질을 함유한 샘플을 10%폴리아크릴아미드 겔에서 전기영동을 실시한 후,폴리비닐리덴 디플루오라이드 막(바이오라드)으로 이송하였다. 5%무 지방 건조 우유로 차단 한 후,막을 1 차 항체에 노출시키고 밤새 4 에서 배양 하였다. 2 차 항체(시그마-알드리치)를 라벨링하고,아머샴 에클 웨스턴 블로 팅 검출 시약을 배양함으로써 도말을 시각화하였다. 이것은 수학적으로 정확한 유형 계층구조인,강력한 타입을 정의합니다.유동 세포 계측법 분석 수집 된 세포를 0.5%함유 된 유동 세포로 씻어 내고,세포 펠릿을 30 분 동안 형광 표지 된 1 차 항체로 배양 한 후 0.5%로 세 번 세척 하였다. 모든 항 체 실험에 적용 하기 전에 조건을 최적화 하기 위해 적정 했다. 유동 세포 계측 분석은 유동 세포 계측기(나무 별,애쉬 랜드,또는,미국)소프트웨어를 사용하여 수행 하였다. 게이트 전략에 기반한 FSC 및 SSC 속성과 설정에 대한 긍정적인 셀룰라에서 인구 FITC,APC 습니다.2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 1 차 유방암 및 재발 성 유방암은 오하이오 주립 대학 병리학과에서 얻은 것입니다.면역조직화학적 염색은 4-10-20-20-20-20-20-20-20-20-20-20-20-20-20-20-20-20-20-20-20-20-20-20-20-20-20-20-20-20 간략히,슬라이드를 탈 카페인 화하고 재수 화하고,항원을 시트 레이트 완충액(산도 6.1)에서 40 분 동안 회수 하였다. 내인성 퍼 옥시다아제 활성은 3%물 2 용액으로 차단되었다. 1 차 항체 배양은 4 에서 수행되었다. 반응 생성물은 퍼 옥시 다제 기질 키트를 사용하여 검출되었고 헤 마톡 실린(벡터 실험실)과 카운터 스턴 팅되었습니다. 2 명의 고위 병리학자는 진료소 유방암의 진단 및 실험적인 종양의 평가에게 맡겨져 있는 이었습니다. 염색 강도 및 염색된 셀의 비율을 사용 하 여 평가 했다. 염색 강도는 0:음수;1:약함;2:보통;3:강함. 높은 발현은 종양 세포의 25%이상에서 강한 염색 강도로 정의되었다;중간 발현은 종양 세포의 25%이상에서 적당한 염색 강도였다; 저렴한 표현이었 약 염색도 25%이상 종양 세포의 또는 중간에서 염색<25%의 종양 세포를 사용하 ASCO-CAP guidelines63 위해 사용되었다는 해석의 HER2 기술(IHC)및 HER2 단백질 발현이었을 얻었으로 부정적인 IHC0(염색하거나 막을 염색하는 것 불완전하고 희미/거의 지각과 내≤10%of the 침습성 종양 세포) 또는 부정적인 IHC1+(불완전한 막을 염색하는 희미/거의 지각에는>의 10%가 침습성 종양 세포); 침윤성 종양세포의 10%내에서 완전 및 원주 막 염색);양성 침윤성 종양세포의 10%이상에서 완전 및 원주 막 염색);양성 침윤성 종양세포의 10%이상에서 완전 및 원주 막 염색);양성 침윤성 종양세포의 10%이상에서 완전 및 원주 막 염색);양성 침윤성 종양세포의 10%이상에서 완전 및 원주 막 염색). 결과가 모호하다면(2+),현장 하이브리드 화(틱)를 사용하여 반사 테스트를 수행했습니다. 표본은 파라핀 용액(폴리 사이언스)에 포함되기 전에 48 시간 동안 시리즈 에탄올(70%,95%및 100%)으로 탈수되었다.면역세포화학은 원피슬립에 시딩하여 60-80%의 합류로 성장시킨 후,4%파라포름알데히드(산도 7.2)로 헹구어내고,0.1%의 트리톤 엑스-100 으로 투과 하였다. 그런 다음 세포를 차단 용액에서 15 분 동안 배양 한 후 1 차 항체와 1:250 희석액으로 밤새 배양 하였다. 1:1000 어둠 속에서 실 온에서 1 시간에 대 한 차단 솔루션에 희석 하 고 공 초점 현미경으로 분석.방사선 관련 항원 단백질의 식별은 0 에서 5 개의 106 개의 세포를 가진 면역 숙주로 사용되었다.마우스 당 꼬리 또는 발 패드 바닥에 1 밀리리터의 부피를 주입 한 다음 14 일째에 동일한 부피의 세포로 부스팅합니다. 두 번째 도전 다음 5-7 일에 쥐 안락사 했다 고 혈 청 항원 분자 방사능 저항 기원전 세포에서 표현 감지 수집 했다. 정상 유방 상피 세포 및 야생형 세포로 발현되는 비특이적 분자와 랩을 구별하기 위해 다음 단계에 의해 원시 혈청으로 사전 세척 절차를 수행했습니다. 200 만 개의 인간 정상 유방 상피 세포를 트립신 없이 1 밀리/피피세포를 함유한 용액으로 제조하여 민감한 단백질의 일부를 소화시키지 않도록 한 후,피피피세포를 2 회 헹구었다. 상기 혼합물을 원심분리한후 9391 에서 5 분 동안 4391 에서 5 분 동안 4391 에서 5 분 동안 4391 에서 5 분 동안 4391 에서 5 분 동안 4391 에서 5 분 동안 4391 에서 5 분 동안 4391 에서 5 분 동안 4391 에서 5 분 동안 4391 에서 5 분 동안 4391 에서 5 분 동안 4391 에서 5 분 동안 1 회 반복한 상청액을 수집하였다. 첫 번째 세정 된 항혈청은 동일한 절차를 사용하여 야생형 세포로 인큐베이션에 의해 추가로 세척되고 6 회 반복되었다. 최종적으로 정제된 항혈청은 유방암 줄기 세포 표지자 및 알데히드 탈수소 효소(알데하이드로게나제)64 에 의해 분류된 단백질 용해에 대하여 웨스턴 블롯에 의해 시험되었다. 그 결과 막 랩은 다수의 단백질 및 단백질 기능 카테고리로 군집되었다.본 연구소는 장래 연구소의 크리스퍼 디자인 소프트웨어가 발표한 지침과 이전 공개 65 에서 기술한 확립된 프로토콜에 따라 설계되었다. 4 개의 올리고 합성 및 복제 된 인간의 스 그라 나에 대응 하 여 설계 되었다 장 실험실 게 코 풀링 라이브러리 증폭 프로토콜에 따라. 비특이적 표적화의 가능성을 최소화하기 위해,각 표적화 유전자의 세 가지 올리고를 합성하고 시험하였다. 웨스턴 블로 팅에 의해 결정된 최상의 녹아웃 효율을 가진 스 그르나는 후속 실험을 위해 선택되었다. 인간 및 마우스 세포에 대해 다음과 같이 그르나 서열을 사용하였다.: AAACGACGCGCACTGT CTGTGCCGC
hCD47gRNA_F: CACCGTAAATATAGATCCGGTGGTA
hCD47gRNA_R: AAACTACCAC CGGATCTATATTTAC
mHer2gRNA_ F: CACCGTGATGGCCCTCGCCCCTCGG
mHer2gRNA_ R: AAACCCGAGGGGCGAGGGCCATCAC
mCD47gRNA_F: CACCGCCCTTGCATCGTCCGTAATG
mCD47gRNA_R: AAACCATTACGGACGATGCAAGGGC
The lentiviral particles were generated using 293T cells following the protocol from Addgene. For gene editing, the isolated BCSC sphere cells or MCF7/C6 cells were trypsinized into single cells and plated 1. 2.5 × 105 cells/0.5 ml per well in the 12-well plates. 12 시간 동안 배양한 후,1 밀리리터의 바이러스-함유 상등액을 8 응 폴리브렌과 함께 세포에 첨가한 후,6 시간 동안 배양하였다. 감염 배지를 2 밀리리터의 신선한 배지로 대체하고 72 시간 동안 배양하였다.루시페라아제 분석법은 루시페라아제 활성도를 루시페라아제 리포터들과 함께 형질전환하였고,루시페라아제 활성도를 루시페라아제 활성도계(프로메가,매디슨,위스콘신)에 의해 측정하였다. 리포터 형질감염 효율의 정상화를 위해,용해물의 총 단백질 농도는 단백질 분석 키트(피어스,록포드,일리노이)로 측정하였다.또한,포름 알데히드(1%최종)와 10 분 동안 가교 결합 된 세포를 얼음처럼 차가운 포름 알데히드로 세척하고,용해 완충액(1%,1%,50,트리스,산도 8)에서 수집 하였다. 1). 염색질은 초음파 처리에 의해 전단되고,단백질 지 공액 아가로오스 비드로 사전 제거되고,항-씨-렐,또는 정상 이그와 함께 배양되었다. 단백질 지를 2 시간 동안 첨가 한 후,상기 복합체를 저염 및 고염 면역 복합체 세척 완충액(0)으로 순차적 방식으로 세척 하였다. 1%,1%,1%,100,20,100,100,100,100,100,100,1001 더하기 150 밀리나클 낮은 소금 및 500 밀리나클 높은 소금 버퍼)다음에 테 버퍼(두 번). DNA 전사 요인의 상호 작용는 역전되었다는 다음의 추가 NaCl 및 배양에서 65°C 다. 페놀/클로로포름 추출 및 에탄올 침전에 의해 정제되었다. 본 발명의 실시예에 따르면,본 발명의 실시예는 다음과 같다. 47 프라이머는:
5′-CGTGGACCAGGACACCTAGG-3′ (sense)
5′-AGGGAAGAGAACCGCATAGG-3′ (antisense)
The PCR amplification of the IκB promoter region (1134/902) was also included as positive. The primers for NF-κB-binding site in the IκB promoter were:
5′-TGTAGCACCCATTAGAAACACTTC-3′ (sense)
5′-TTCTTGTTCACTGACTTCCCAAT-3′ (antisense).
Preparation of anti-human and anti-mouse CD47 antibodies
Hybridoma for monoclonal mouse anti-human CD47 antibody (B6H12.2), IgG2b were obtained from ATCC. 또한,이 연구에서는 쥐의 항체 및 항체를 연구하기 위한 실험적인 연구를 수행하였다. 두 하이브리도마 세포주 모두 20%인 신입생 배지에서 유지되었다. 제조 표준 절차에 따라 젠스크립트로부터 단백질 지 수지를 사용하여 하이브리도마 상청액으로부터 항체를 정제하였다. 그런 다음 폴 생명 과학에서 마이크로 셉 원심 분리 장치를 사용하여 샘플을 10-20 배 더 농축했습니다. 순화된 이그그그 농도는 오드 280 에서 흡수도를 측정함으로써 결정되었다.2013 년 1 월 1 일,2013 년 1 월 1 일,2013 년 1 월 1 일,2013 년 1 월 1 일,2013 년 1 월 1 일,2013 년 1 월 1 일,2013 년 1 월 1 일,2013 년 1 월 1 일,2013 년 1 월 1 일,2013 년 1 월 1 일,2013 년 1 월 1 일,2013 년 1 월 1 일,2013 년 1 월 1 일,2013 년 1 월 1 일,2013 년 에 대해 0.8×106cells/ml 의 원 264.5 세포 또는 1×106THP1 세포에 시드 6-well plate. 24 시간의 배양 원료 264.7 세포를 24 시간 동안 0.1 리포 폴리 사카 라이드로 처리하여 활성화시킨 후,24 시간 동안 단핵구 세포를 포볼 12-미리 스테이트 13-아세테이트(40 나노)에 의해 분화시켰다. 활성화 된 대 식 세포 20 분 동안 매체에 마지막 협주 40 나노 미터에서 디오 염색 했다 다음 세 번 매체와 세척. 15 분 동안 15 분 동안 15 분 동안 15 분 동안 15 분 동안 15 분 동안 15 분 동안 15 분 동안 15 분 동안 15 분 동안 15 분 동안 15 분 동안 15 분 동안 15 분 동안 15 분 동안 15 분 동안 15 분 동안 15 분 동안 15 분 동안 15 분 동안 15 분 동안 15 분 동안 15 분 동안 15 분 동안 15% 표적세포(106)를 디오-염색된 표적세포(106)에 첨가하고,2 시간 동안 37 표적세포에서 2 밀리리터의 최종 부피로 배양하였다. 식균 작용은 유세포 계측법을 통해 성숙한 유방암세포에 의해 식세포화 된 유방암 세포를 나타내는 이중 표지 세포(디오+/디다오+)를 평가함으로써 평가되었다. 플로우조 소프트웨어는 분석을 위해 사용되었다.치료 유무에 관계없이 방사선에 따라 클론 생성 생존 분석을 수행 하였다(라파티닙,72 시간,항체 47 항체 10,10,10,10,10,10,20,20,20,20,20,20,20,20,20,20,20,20,20,20,20,20,20,20,20,20,20,20,20,20,20,20,20,20,20). 처리 된 세포를 10-14 일 동안 배양하고 콜로니를 고정시키고 쿠마시에 청색 얼룩으로 염색 하였다. 50 개 이상의 세포를 포함 하는 콜로니 살아남은 클론으로 계산 하 고 각 가짜 처리 종양 세포 라인의 도금 효율을 정규화 했다.갭-충진 속도 분석실험 갭-충진 용량은 각각 6-웰 플레이트에서 100%합류까지 성장한 106 개의 세포로 측정하였고,이어서 24 시간 세포 기아가 발생하였다. 그런 다음 멸균 피펫 팁으로 접시를 대각선으로 긁어서 간격을 만들었습니다. 실험 기간 동안 세포를 치료하지 않고 방치하거나 10 개의 항체 또는 항체 항체로 처리 하였다. 72 시간 동안 충전 용량을 모니터링하고 0 일(스크래핑 일)및 3 일에 대표 이미지를 촬영했습니다.세포 여과기를 40 개로 체질하였다(카탈로그#352340). 코닝)및 단일 세포 현탁액을 1000 세포/밀리리터의 밀도로 저 부착 60 밀리미터 페트리 접시에 시드 하였다. 유 방 상피 기저 배지에서 성장 했다. 또한,이 약물은 항 염증 효과,항 염증 효과,항 염증 효과,항 염증 효과,항 염증 효과,항 염증 효과,항 염증 효과,항 염증 효과,항 염증 효과,항 염증 효과,항 염증 효과 등이 있습니다. 2015 년 12 월 1 일,2015 년 12 월 1 일,2015 년 12 월 1 일,2015 년 12 월 1 일,2015 년 12 월 1 일. 헤파린,헤파린,헤파린,헤파린,헤파린,헤파린,헤파린,헤파린,헤파린,헤파린,헤파린,헤파린,헤파린,헤파린,헤파린 및 헤파린. 세포를 10 일 동안 배양하고,종양을 광 현미경으로 계수하였다.(2014 년 10 월 15 일). 4 밀리리터)마트리겔(카탈로그#356231. 200-300 밀리리터의 최종 농도까지 0.7%의 코팅 완충액으로 희석 하였다. 24 웰 트랜스 웰의 상부 챔버(카탈로그#3422. 1 시간 동안 겔화를 위해 37,000,000,000,000 에서 배양 하였다. 층을 방해하지 않고 투과성지지 막에서 남은 코팅 완충액을 조심스럽게 제거한 다음 셀을 추가하십시오(2.5 104/밀리리터). 상기 하부 챔버는 5 개의 피브로넥틴(카탈로그#사우스 캐롤라이나-29011)을 함유하는 800 개의 멤 배지로 채워졌다. 산타 크루즈). 다르게 처리 된 세포를 가진 트랜스 웰을 48 시간 동안 배양하고 차이 빠른 얼룩 키트로 염색 하였다. (주)아이멥본 발명의 실시예에 따르면,본 발명의 실시예에 따르면,본 발명의 실시예에 따르면,본 발명의 실시예에 따르면,본 발명의 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 제조업체의 권장 사항 및보고 된 절차에 따라 67. 파파인 소화 후,팹 단편을 소화되지 않은 이그그로부터 분리하였고,팹 단편화 키트로부터 단백질 스핀 칼럼을 갖는 이그그그 영역으로부터 탈염 칼럼을 공급하여 초기 항체 샘플이 팹 단편화를 위한 최적의 조건이 되도록 하였다.
방사선의 기원전이 세포와 CRISPR-KO CD47 및/또는 HER2
For in vivo 시험의 종양 억제 효과 방사선에 의해 결핍 CD47 및 HER2status,5×105 4T1/C2 셀 CRISPR-의 녹아웃 CD47(CD47−/−),HER2(HER2−/−)또는 이중(CD47−/−/HER2−/−) 이식되었으로 유지방의 패드 BALB/c(n=6 당 그룹). 종양 성장은 종양 부피가 한계에 도달 할 때까지 7 일째부터 2 일마다 종양 부피를 측정하여 평가되었습니다. 종양 성장 제어 종양 최대 제한에 도달할 때까지 격일로 측정 했다.방사선 요법의 존재 또는 부재 하에서 단일 시디 47 항체를 이용한 종양 억제의 생체 내 시험을 위해,항-시디 47 치료는 윌링엄 외 알 20 에 의한 프로토콜을 따라 약간의 변형과 함께 하였다. 8 주 된 면역 능력이 있는 암컷 쥐(찰스 리버 연구소,새크라멘토,미국)에 1 개의 105 개의 마우스 유방 4 티 1 세포를 4 번째 유방 땀샘에 주사했습니다. 종양 부위(1 일)또는 종양 조직(15 일)에 주입하고 실험이 끝날 때까지 격일로 반복하였다. 종양 부피는 5 일마다 모니터링되었습니다. 방사선 치료,항-시디 47,또는 항-시디 47 과 결합된 방사선의 경우,4 티 1 종양을 갖는 동물을 다양한 치료군 및 대조군(그룹당 5-10 마리의 마우스)으로 무작위로 나누었다. 종양 국소 방사선은 종양 부피가 200 밀리미터에 도달 할 때 시작되었습니다.3 전나무(마이크로 빔 적외선 소스를 사용하여 4 개의 분획에 대해 5 개/일/종양;총 용량=20 그램). 생체 내 방사선 감도는 실험이 끝날 때 종양 부피를 측정하여 평가 하였다. 1400 밀리미터이상일 때나 1400 밀리미터이상일 때나 1400 밀리미터이상일 때나 척추동물사용 규정의 준수를 위해 안락사를 하였다. 생체 내 방사선 요법의 동물 사용 및 관리 프로토콜은 캘리포니아 데이비스 대학의 기관 동물 사용 및 관리위원회에 의해 승인되었습니다.방사선 요법의 존재 또는 부재 하에서,8 주 된 면역 능력이있는 암컷 마우스(찰스 리버 연구소,새크라멘토,미국)는 1 개의 105 개의 마우스 유방 4 세포를 4 번째 유방 땀샘에 주사했다. 종양 부피가 약 200 밀리 3 에 도달했을 때,마우스를 무작위로 4 개의 그룹(그룹 당 6 마리의 마우스)으로 나누었다. 또한,종양 조직(100-100%)은 국소 방사선 요법(2 일 동안 하루 5 회)전에 4 시간 동안 종양 조직에 주입되었다. 주사를 실시 하 고 종양 크기 실험의 끝까지 격일로 모니터링 했다. 생쥐는 종양이 1400 밀리미터 이하일 때 또는 종양이 1400 밀리미터 이하일 때조차도 불편한 것처럼 보였을 때 안락사되었다. 생체 내 방사선 요법의 동물 사용 및 관리 프로토콜은 캘리포니아 데이비스 대학의 기관 동물 사용 및 관리위원회에 의해 승인되었습니다.암세포의 침윤성 대식세포와 대식세포의 식균작용 세포들을 발현 마우스의 4 번째 유선지방패드에 이식하고,종양 주입에 의해 약 200 밀리그램의 종양이 달성되었을 때 치료를 개시하였다. 종양 국소 실온은 10 일 및 11 일에 2 회 분획에 대해 5 회/일/종양으로 전달되었고,총 용량=10 회,항체 치료 종료 2 일 후에 실험을 종료 하였다. 1.면역 형광 염색을 위해 표준 절차를 따르기 위해 슬라이드를 탈파핀화 및 재수 화하고,항원을 시트 레이트 완충액에서 40 분 동안 회수 하였다 물.2.자가형광을 제거하기 위해,슬라이드를 탈자가형광 용액에 모아서 48 시간 동안 물에 5 분 3 회 헹구어 낸 다음 1:1 로 차단 하였다.100 말 혈청. 1 차 항체 배양은 1 차 항체 배양에서 1 차 항체 배양에서 1 차 항체 배양에서 1 차 항체 배양에서 1 차 항체 배양에서 1 차 항체 배양에서 1 차 항체 배양에서 1 차 항체 배양으로 이루어졌다.; 1:250 희석된 형광 공액 2 차 항체(로다민,알렉사 플루오르 488)로 배양한 후,다피를 함유하는 벡터실드 안티페이드 용액(벡터 실험실,벌링게임,캘리포니아,미국)으로 장착하였다. 대 식 세포 매개 식균 작용 공리 비전 소프트웨어(자이스,독일)를 사용 하 여 형광 현미경으로 검출 하 고 마이크로 사진 이미지에 의해 정량화 했다.시험관 내 세포 연구 및 동물 실험에서 얻은 모든 실험 데이터는 두 그룹에 대한 두 꼬리 학생 티 테스트 또는 여러 그룹에 대한 분산 분석을 사용하여 분석됩니다. 카플란-마이어 생존 곡선의 통계적 유의성은 맨-휘트니 테스트로 평가되었다. 독립적 인 실험과 복제 횟수는 그림 범례에 표시되었습니다. 0.05 는 중요한 것으로 간주되어 다음과 같이 별표로 표시됩니다.*2018 년 10 월 15 일,2018 년 10 월 15 일,2018 년 10 월 15 일,2018 년 10 월 15 일,2018 년 10 월 15 일,2018 년 10 월 15 일,2018 년 10 월 15 일,2018 년 10 월 15 일,2018 년 10 월 15 일,2018 년 10 월 15 일,2018 년 10 월 15 일,2018 년 10 월 15 일,2018 년 10 월 15 일,2018 년 10 월 15 일,2018 년 10 월 15 일,2018 년연구 설계에 대한 추가 정보는 이 문서에 링크된 자연 연구 보고 요약에 나와 있습니다.