Les cellules souches neurales (CSN) donnent naissance au système nerveux central (SNC) au cours du développement et contribuent à la plasticité cellulaire du cerveau des mammifères adultes. L’isolement et la culture in vitro des CNS offrent l’occasion unique d’aborder des questions fondamentales sur la prolifération cellulaire, le choix du destin, la différenciation et la maturation synaptique dans des conditions définies expérimentalement. Le fondement théorique de la biologie des NSC repose essentiellement sur les trois propriétés déterminantes qu’un seul NSC doit remplir: l’auto-renouvellement, la multipotence et la clonalité. Un outil de culture cellulaire populaire, le neurosphere assay, est utilisé pour étudier ces caractéristiques clés des CSN depuis 1992. Des tests similaires sont maintenant utilisés pour d’autres cellules souches somatiques, y compris les cellules souches cancéreuses. Des progrès récents dans le domaine des cellules souches ont été réalisés en revisitant le concept de neurosphère et en démontrant son potentiel réel et ses limites. Cet article traite des conséquences immédiates de ces résultats et souligne la nécessité d’un protocole amélioré et communément accepté pour la caractérisation des CNS in vitro.